Electroforesis de proteínas

Electroforesis de proteínas
y de ácidos nucléicos
Se denomina electroforesis a la técnica mediante la cual se separan las biomoléculas en disolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico.Se trata de una técnica fundamentalmente analítica, aunque también se puede realizar con fines preparativos.
La fuerza que hace que los fragmentos que se van a analizar se muevan a lo largo del geles un campo eléctrico. En el caso del ADN la cosa es sencilla, ya que el ADN es una molécula que en condiciones fisiológicas está cargada negativamente. Así, en un campo eléctrico lineal a pHfisiológico, cualquier molécula de ADN se moverá hacia el polo positivo del campo.
Cada molécula se desplaza por efecto del campo, alcanzando rápidamente una velocidad constante al equilibrarse la fuerzaimpulsora (fuerza del campo eléctrico) con la resistencia al avance (fuerza de fricción o rozamiento) impuesta por el medio en el que se desplaza.
Modos de disposición del soporte
HorizontalEn papel, para aminoácidos u otras moléculas pequeñas, y en soportes similares (especialmente, acetato de celulosa), para proteínas.
En gel de almidón o de agarosa, para proteínas y especialmentepara ácidos nucléicos. Casi siempre el tampón cubre el gel (para evitar que se seque debido al calentamiento sufrido al pasar la corriente), denominándose por ello “electroforesis submarina”.
Soporteimpregnado de disolución tampón por capilaridad, disuelve la muestra y mantiene el contacto eléctrico.
Vertical
Casi exclusivamente con gel de poliacrilamida (más resistente físicamente, no sedesliza), para proteínas o para ácidos nucléicos de pequeño tamaño.
El gel puede rellenar tubos de vidrio (cada vez se usa menos) o estar contenido entre 2 placas rectangulares. Contacto eléctrico ydisolvente gracias al tampón que embebe el gel y llena las cubetas o compartimentos del ánodo y cátodo.
La muestra se deposita con micropipeta. En cuanto a la composición del gel hay dos variantes:...