Electroforesis Y Pcr

LABORATORIO DE ELECTROFORESIS Y PCR

GENÉTICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR

PRESENTADO POR:

JUAN CAMILO SILVA

PRESENTADO A:

MARIBEB CASTRO GONZALEZ

UNIVERSIDAD DEL TOLIMA
Lic. En Educación Básica Con Énfasis En Ciencias Naturales Y Educación Ambiental
IBAGUE – TOLIMA
2012
INTRODUCCIÓN

Este laboratorio fue realizado con el fin de hacer una demostración del funcionamiento y manejode las técnicas de PCR y electroforesis.La técnica conocida como PCR por sus siglas en inglés (Polymerase Chain Reaction), es una técnica de biología molecular  cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo.
La electroforesis constituye parte importante del procedimiento rutinario del análisis de los ácidos nucleicos y proteínas. Y asícomo el microscopio permite visualizar microorganismos y estructuras similares, la electroforesis nos ayuda a observar los ácidos nucleicos y proteínas al final del procedimiento. EL proceso de electroforesis se basa en la migración de las moléculas con carga neta de una muestra, cuando es sometida a un campo eléctrico, hacia el polo opuesto de su carga.

MARCO TEÓRICO

La reacción en cadenade la polimerasa (RCP) es una técnica de biología molecular desarrollada en 1986 por KaryMullis, esta técnica ha revolucionado la genética molecular, ya que gracias a ella se ha hecho posible estudiar y analizar un gran número de genes, como virus o bacterias causantes de enfermedades, identificar personas por medio de sus cadáveres.

Anteriormente en genética molecular no se contaba con unatécnica sencilla y fácil de manejar, se tenía que recurrir a técnicas costosas y complejas. “La técnica de PCR permite producir un enorme número de copias de una secuencia de DNA especifica (amplificarla), sin recurrir a la clonación”(Torres, A. Baca, B. 2007).

¿Qué es la reacción en cadena de la polimerasa?

“La PCR es un método in vitro de síntesis de ADN con el que un segmento particular deeste es específicamente amplificado al ser delimitado por un par de cebadores o iniciadores que lo flaquean. Su copiado se logra en forma exponencial a través de repetidos ciclos de diferentes periodos y temperaturas de incubación en presencia de una enzima DNA polimerasa termoestable. Así se tiene en cuestión de horas millones de copias de la secuencia deseada del ADN”. (Rodríguez, I. Barrera, H.2004).

¿Cómo funciona la PCR?

La reacción consta, por lo regular, de una treintena de ciclos repetitivos conformados cada uno de tres pasos: el primero consiste en la ruptura de los puentes de hidrogeno del ADN para desnaturalizarlo, para lo que se incuba a una temperatura de alrededor de 95ºC, por un minuto. Este paso expone las bases nitrogenadas del ADN blanco. En el segundo ocurre lahidratación de las cadenas desnaturalizadas del ADN blanco con los dominados cebadores o indicadores (ADN sintético de hebras sencilla). A una temperatura que facilita el apareamiento de las bases nitrogenadas complementarias de ambas clases de ADNs. Esta temperatura depende de la temperatura de fusión (Tm) de los indicadores, la cual puede calcularse mediante la siguiente formula Tm= (2ºC) (# deA+T) + (4ºC) (# de G+C). Pero generalmente oscila entre 50 y 60ºC. El tercer paso se efectúa a 72ºC, temperatura a la que la polimerasa extiende la longitud de los cebadores, añadiendo los diferentes nucleótidos libres en el orden que le va dictando la secuencia de nucleótidos de la cadena que actúa como molde.

Fuente: AndyVierstracte 1999

Las bases nitrogenadas

Fuente: Rodríguez, I.Barrera, H. 2004

estos componentes de los nucleotidos son la clave de la especificidad del del apareo de las cadenas del ADN, apareandose siempre una purina con una pirimidina.

Electroforesis
El termino electroforesis se emplea para describir la migración de partículas cargadas bajo la acción de un campo eléctrico. La electroforesis constituye una Técnica de separación basada en diferentes...