Electroforesis

ELECTROFORESIS
Las proteínas suelen tener una carga positiva o negativa, que reflejan los aminoácidos cargados que contienen. Si se aplica un campo eléctrico a una solución que contenga una moléculade proteína, la proteína migrara a una velocidad que dependerá de su carga total, de su tamaño y se du forma. Esta técnica es conocida como electroforesis, la cual se utilizo para separa mezclas deproteínas en soluciones acuosas e incluidas en una matriz solida porosa como el almidón.
ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA CON GEL SDS (DODECIL SULFATO SODICO)
En los años 60´se desarrollo unaversión modificada de este método llamada electroforesis es gel de poliacrilamida con SDS (ó SDS-PAGE de PolyAcrilamide-Gel Electrophoresis). Consta de una matriz inerte en la que a través de ellamigran las proteínas, donde se utiliza un gel de poliacrilamida con numerosos puentes cruzados.
Dicho gel se prepara antes de utilizarse mediante la polimerización apartir de monómeros, el tamaño delporo del gel puede ajustarse de forma que sea el adecuado para retrasar la migración de las proteínas de interés. Las proteínas no se colocan en una solución simple, sino en una solución que contieneun detergente de carga negativa, el Dodecil sulfato sódico o SDS (de Sodium Dodecyl Sulfate). Este detergente se une a las regiones hidrofobicas de las proteínas, haciendo que se desplieguen lascadenas polipeptidicas, las diferentes moléculas de proteínas quedan liberadas de sus asociaciones con otras moléculas proteicas o lipidicas y se disuelven libremente con el detergente.
Se suele añadir unagente reductor como el mercaptoetanol con el objetivo de romper los enlaces S-S que pudieran existir en las proteínas, para que puedan analizarse por separado todos los polipeptidos que constituyanlas moléculas y que puedan contener subunidades.
Cada molécula de proteína se une a una gran cantidad de moléculas de detergente cargadas negativamente, que anulara la carga de la proteína y hacen...