Electroforesis

Técnicas en Bioquímica

Movimientos Iónicos en un Campo Eléctrico

Las proteínas y ácidos nucleicos suelen tener una carga neta positiva o negativa a causa de las cargas eléctricas de sus unidades monoméricas (aminoácidos y nucleótidos respectivamente). Para separar distintas especies moleculares, se crea un campo eléctrico para la molécula colocada en un líquido portador, recordemosque un campo eléctrico es aquel campo de fuerza creado por la atracción y repulsión de cargas eléctricas (la causa del flujo eléctrico),

Si, por ejemplo, se aplica un campo eléctrico a una solución que contiene una molécula proteica con carga neta negativa esta migrará al electrodo positivo o ánodo, (un electrodo es donde se produce la reacción de oxidación o trasferencia de electrones)
si porel contrario posee una carga neta positiva, esta migrará al electrodo negativo (cátodo).De cualquier manera, su velocidad de migración dependerá de su carga neta y también de su tamaño y su forma.

Trabajar con Proteínas

Nuestros conocimientos de la estructura y función de las proteínas provienen del estudio de muchas proteínas individuales. Para estudiar una proteína con ciertodetalle es necesario separarlas del resto de proteínas y disponer de técnicas que permitan determinar sus propiedades. Loa métodos necesarios provienen de la química de proteínas, disciplina tan antigua como la bioquímica que mantiene una posición central en la investigación bioquímica.

Proceso de Electroforesis

La electroforesis se basa en el desplazamiento de las proteínas cargadas en un campoeléctrico, con velocidad proporcional a su carga e inversamente proporcional a su tamaño. Esta se lleva a cabo generalmente en geles formados por el polímero entrecruzado poliacrilamida, también se emplea con otro método basado en la utilización del detergente dodecil sulfato sódico (SDS), y además encontramos a la electroforesis en geles de Agarosa y en papel. Dependiendo de la técnica que seuse, la separación obedece en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa.

Es de destacar que a escala analítica, los métodos electroforéticos son de alta sensibilidad, poder de resolución y versatilidad, y sirven como método de separación de mezclas complejas de ácidos nucleicos, proteínas y otras biomoléculas, donde aportan un potente criterio de pureza. Se pueden conocertambién mediante estas técnicas, las características ácido-básicas de las proteínas presentes en un extracto crudo, lo que da la información necesaria si se pretende realizar una separación cromatográfica basada en diferencias de carga. Es útil además para determinar otros parámetros como peso molecular, punto isoeléctrico y número de cadenas polipeptídicas de las proteínas.

En laelectroforesis, la fuerza que mueve la macromolécula es el potencial eléctrico, E. La movilidad electroforética de la molécula, u, es el cociente entre la velocidad de la partícula, V, y el potencial eléctrico. La movilidad electroforética también es igual a la carga neta de la molécula, Z, dividida por el coeficiente friccional, f, que refleja en parte la forma de la proteína.u = V = Z
E f

Cámara electroforética

Es el dispositivo utilizado para llevar a cabo el proceso electroforético; algunas son horizontales y otras verticales. En general, una cámara de electroforesis vertical puede tener los siguientes componentes:

➢ Dos placas de vidrio del mismogrosor y altura para formar el molde.
➢ Dos espaciadores para determinar el grosor del gel
➢ Un peine para moldear los pocillos donde se colocarán las muestras.
➢ Un soporte o base para ensamblar los vidrios con los espaciadores.
➢ El tanque de electroforesis que contiene el buffer de corrida.
➢ La fuente de poder que provee de energía eléctrica a la cámara electroforética....