Electroforesis
Páginas: 5 (1112 palabras)
Publicado: 12 de julio de 2011
Práctica 1. Electroforesis
Instituto Tecnológico de Zacatepec. Ingeniería Bioquímica. Asignatura: Biotecnología Av. Tecnológico s/n, Zacatepec, Morelos.
Introducción.
La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoleculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.
Cuandouna mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta son colocadas en un campo eléctrico, estas experimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta, dejando transcurrir cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazaran hacia el ánodo (el polo positivo).
El movimiento delas moléculas está gobernado también por dos fuerzas adicionales; inicialmente la fricción con el solvente dificultará este movimiento originando una fuerza que se opone , por otro lado las moléculas tienen que moverse en forma aleatoria o movimiento browniano debido a que poseen energía cinética propia denominado difusión. La energía cinética de las moléculas aumenta con la temperatura, porello a mayor temperatura mayor difusión.
La suma de todas estas fuerzas provoca que las moléculas no migren de una manera homogénea, de tal manera que, si las moléculas son colocadas en un cierto lugar de solución, los iones comenzaran a moverse formando un frente cuya anchura aumentara con el tiempo.
Para reducir la anchura de este frente podemos reducir el movimiento de las moléculasempleando un medio que oponga más resistencia a dicho movimiento. Una forma común de hacer esto es formar un gel. El gel consiste de un polímero soluble de muy alto peso molecular que atrapa moléculas de agua y forma un tamiz que dificulta el movimiento de los solutos, consecuentemente, la migración electroforética de las moléculas será más lenta, pero el ensanchamiento del frente se verá reducido.La electroforesis es una técnica muy sensible y puede ser afectada por muchos errores experimentales, como la temperatura durante la polimerización y la corrida del gel, velocidad de la polimerización, niveles de catalizador, pureza del reactivo, tiempo de corrida y preparación de las muestras.
Extracción de DNA casero
Material y reactivos.
Alcohol
Sal
Detergente liquido
Ablandadorde carne
Fuente de DNA: Hígado de pollo.
Agua
Licuadora
Probeta
Cuchara
Pañalina
1 recipiente de plástico
Cotonetes
Bolsas de plástico.
Procedimiento.
En una licuadora se coloco ½ taza de hígado de pollo, se le adiciono 2 tantos de agua fría, una pizca de sal, mezclándose durante 15 minutos (en intervalos de 3 minutos).
La mezcla obtenida se filtro con la ayuda de pañalina,posteriormente se le agrego 30 ml de detergente liquido, se mezclo cuidadosamente.
Se dejo reposar en el refrigerador durante 10 minutos.
Transcurrido el tiempo, se lleno una tercera parte de una probeta, y se le agrego una pizca de ablandador de carne.
Se le agrego alcohol de caña (un tercio de la probeta), para esto se inclino la probeta y se le adiciono cuidadosamente por las paredes, Se mezclosuavemente.
Terminando el procedimiento se observo una capa blanca sobre la mezcla, (indicaba la presencia de DNA) Con ayuda de un cotonete se tomo una muestra de dicha capa, se coloco en una bolsa de plástico nueva, y se guardo en el congelador hasta que se requirió en el laboratorio.
Electroforesis.
Material y reactivos.
Cámara de electroforesis y accesorios
1 matraz erlenmeyer de 250 ml3 matraces aforados de 500 ml
1 espátula
1 piseta
1 pipeta de 1 ml
Bortex
Parilla
Micropipetas
Lámparas de UV
Puntas de polipropileno
Tris base
Acido bórico
EDTA
Agarosa
Bromuro de etidio
Colorantes
Procedimiento
Preparación buffer tris-borato (2.2 L)
Reactivo Cantidad (g)
Tris base 23.76
Acido bórico 12.1
EDTA 2.046
Cada reactivo se preparo por separado en un...
Instituto Tecnológico de Zacatepec. Ingeniería Bioquímica. Asignatura: Biotecnología Av. Tecnológico s/n, Zacatepec, Morelos.
Introducción.
La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoleculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.
Cuandouna mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta son colocadas en un campo eléctrico, estas experimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta, dejando transcurrir cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazaran hacia el ánodo (el polo positivo).
El movimiento delas moléculas está gobernado también por dos fuerzas adicionales; inicialmente la fricción con el solvente dificultará este movimiento originando una fuerza que se opone , por otro lado las moléculas tienen que moverse en forma aleatoria o movimiento browniano debido a que poseen energía cinética propia denominado difusión. La energía cinética de las moléculas aumenta con la temperatura, porello a mayor temperatura mayor difusión.
La suma de todas estas fuerzas provoca que las moléculas no migren de una manera homogénea, de tal manera que, si las moléculas son colocadas en un cierto lugar de solución, los iones comenzaran a moverse formando un frente cuya anchura aumentara con el tiempo.
Para reducir la anchura de este frente podemos reducir el movimiento de las moléculasempleando un medio que oponga más resistencia a dicho movimiento. Una forma común de hacer esto es formar un gel. El gel consiste de un polímero soluble de muy alto peso molecular que atrapa moléculas de agua y forma un tamiz que dificulta el movimiento de los solutos, consecuentemente, la migración electroforética de las moléculas será más lenta, pero el ensanchamiento del frente se verá reducido.La electroforesis es una técnica muy sensible y puede ser afectada por muchos errores experimentales, como la temperatura durante la polimerización y la corrida del gel, velocidad de la polimerización, niveles de catalizador, pureza del reactivo, tiempo de corrida y preparación de las muestras.
Extracción de DNA casero
Material y reactivos.
Alcohol
Sal
Detergente liquido
Ablandadorde carne
Fuente de DNA: Hígado de pollo.
Agua
Licuadora
Probeta
Cuchara
Pañalina
1 recipiente de plástico
Cotonetes
Bolsas de plástico.
Procedimiento.
En una licuadora se coloco ½ taza de hígado de pollo, se le adiciono 2 tantos de agua fría, una pizca de sal, mezclándose durante 15 minutos (en intervalos de 3 minutos).
La mezcla obtenida se filtro con la ayuda de pañalina,posteriormente se le agrego 30 ml de detergente liquido, se mezclo cuidadosamente.
Se dejo reposar en el refrigerador durante 10 minutos.
Transcurrido el tiempo, se lleno una tercera parte de una probeta, y se le agrego una pizca de ablandador de carne.
Se le agrego alcohol de caña (un tercio de la probeta), para esto se inclino la probeta y se le adiciono cuidadosamente por las paredes, Se mezclosuavemente.
Terminando el procedimiento se observo una capa blanca sobre la mezcla, (indicaba la presencia de DNA) Con ayuda de un cotonete se tomo una muestra de dicha capa, se coloco en una bolsa de plástico nueva, y se guardo en el congelador hasta que se requirió en el laboratorio.
Electroforesis.
Material y reactivos.
Cámara de electroforesis y accesorios
1 matraz erlenmeyer de 250 ml3 matraces aforados de 500 ml
1 espátula
1 piseta
1 pipeta de 1 ml
Bortex
Parilla
Micropipetas
Lámparas de UV
Puntas de polipropileno
Tris base
Acido bórico
EDTA
Agarosa
Bromuro de etidio
Colorantes
Procedimiento
Preparación buffer tris-borato (2.2 L)
Reactivo Cantidad (g)
Tris base 23.76
Acido bórico 12.1
EDTA 2.046
Cada reactivo se preparo por separado en un...
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