electroforesis
Páginas: 6 (1446 palabras)
Publicado: 13 de octubre de 2013
CUANTIFICACION DE PROTEINAS Y ELECTROFORE
INTRODUCCIÓN
>Cuantificación de proteínas
Existen diversos métodos para la cuantificación de proteínas, todos ellos basados en alguna de sus propiedades típicas, como pueden ser los patrones de absorción de las radiaciones electromagnéticas de los grupos aromáticos, la reactividad el enlace peptídico, su contenido de nitrógeno, etc.1
1 SalvadorBadui Dergal, Química de los Alimentos, p.151.
>Electroforesis
Es una técnica para separar las moléculas en diferentes cargas y tamaños a través de un campo eléctrico, típicamente se utiliza esta técnica para proteínas o DNA.(1)
1. http://glosarios.servidoralicante.com/genetica/electroforesis
Las muestras de forma general se ponen en un matriz de gel, para las proteínas se utiliza unamatriz de poliacrilamida, a esta se le denomina PAGE (por sus siglas en ingles polyacrilamide gel electrophoresis). Al someter las moléculas a un campo eléctrico, en donde las moléculas migraran en el gel de arriba hacia abajo de acuerdo a la carga eléctrica neta que presenten al encontrarse en su punto isoeléctrico, por esto tienen la propiedad de desplazarse cuando son sometidas a un campoeléctrico. Donde las moléculas con mayor peso molecular las encontraremos en la parte de arriba de la matriz y las más pequeñas en la parte de abajo. (2) 2.http://acasti.webs.ull.es/docencia/practicas/9.pdf
La velocidad en que la migración de proteínas es proporcional a las cargas de la proteína y de su masa, se representa de esta forma:v =Eq/f
En donde: E es el campo eléctrico en volts/cm, q es la carga neta en la molécula f es el coeficiente de fricción(depende de la masa y de la forma de la molécula) v es la velocidad de migración de la molécula.(3) 3. Boyer, R.F. 2000 Modern Experimental Biochemistry 3rd edition. Pearson Benjamín Cummings. USA
Se utilizan para la electroforesis comúnmente geles de poliacrilamida ya que son químicamente inertes, porosidad, transparentes y estables en cuanto a pH, temperatura y fuerza iónica. (4)4.http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/labbioqgen/archivos/Lomonte%20%20Cap13%20PAGE.pdf
La poliacrilamida se forma por la copolimerizacion de acrilamida y bis-acrilamida en presencia de un iniciador y un catalizador, en una reacción iniciada por la tetrametiletilendiamina (TEMED) (iniciador) y el persulfato de amonio (catalizador). Donde las reacciones que ocurren es que el radical persultatoactiva al TEMED, el cual a su vez activa el monómero de acrilamida para que polimerice. Las cadenas de poliacrilamida son entrecruzadas al azar por la bis-acrilamida, formándose una red porosa uniforme, lo cual significa que la porosidad depende de las concentraciones estos monómeros. Mientras más grande sea la concentración de poliacrilamida el poro es más pequeño que sirve para analizar moléculas debajo peso
molecular. El porcentaje utilizado de poliacrilamida/bis-acrilamida determina la separación del gel. (5)
5. http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/lab-bioq-gen/archivos/Lomonte%20-%20Cap13%20PAGE.pdf
La electroforesis puede clasificarse en nativa o desnaturalizante, esto se basa de acuerdo al estado de las proteínas a lo largo del proceso:
Electrolisisdesnaturalizante: es la más común, somete a las proteínas a migración asegurando la completa desnaturalización (perdida de estructura tridimensional). La migración es proporcional a la carga y al tamaño de la molécula pero no a su forma. El agente empleado para desnaturalizar es sodio de silsulfuro o SDS, un detergente.
Electrolisis nativa: es la que somete a las proteínas a migración sin desnaturalización....
INTRODUCCIÓN
>Cuantificación de proteínas
Existen diversos métodos para la cuantificación de proteínas, todos ellos basados en alguna de sus propiedades típicas, como pueden ser los patrones de absorción de las radiaciones electromagnéticas de los grupos aromáticos, la reactividad el enlace peptídico, su contenido de nitrógeno, etc.1
1 SalvadorBadui Dergal, Química de los Alimentos, p.151.
>Electroforesis
Es una técnica para separar las moléculas en diferentes cargas y tamaños a través de un campo eléctrico, típicamente se utiliza esta técnica para proteínas o DNA.(1)
1. http://glosarios.servidoralicante.com/genetica/electroforesis
Las muestras de forma general se ponen en un matriz de gel, para las proteínas se utiliza unamatriz de poliacrilamida, a esta se le denomina PAGE (por sus siglas en ingles polyacrilamide gel electrophoresis). Al someter las moléculas a un campo eléctrico, en donde las moléculas migraran en el gel de arriba hacia abajo de acuerdo a la carga eléctrica neta que presenten al encontrarse en su punto isoeléctrico, por esto tienen la propiedad de desplazarse cuando son sometidas a un campoeléctrico. Donde las moléculas con mayor peso molecular las encontraremos en la parte de arriba de la matriz y las más pequeñas en la parte de abajo. (2) 2.http://acasti.webs.ull.es/docencia/practicas/9.pdf
La velocidad en que la migración de proteínas es proporcional a las cargas de la proteína y de su masa, se representa de esta forma:v =Eq/f
En donde: E es el campo eléctrico en volts/cm, q es la carga neta en la molécula f es el coeficiente de fricción(depende de la masa y de la forma de la molécula) v es la velocidad de migración de la molécula.(3) 3. Boyer, R.F. 2000 Modern Experimental Biochemistry 3rd edition. Pearson Benjamín Cummings. USA
Se utilizan para la electroforesis comúnmente geles de poliacrilamida ya que son químicamente inertes, porosidad, transparentes y estables en cuanto a pH, temperatura y fuerza iónica. (4)4.http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/labbioqgen/archivos/Lomonte%20%20Cap13%20PAGE.pdf
La poliacrilamida se forma por la copolimerizacion de acrilamida y bis-acrilamida en presencia de un iniciador y un catalizador, en una reacción iniciada por la tetrametiletilendiamina (TEMED) (iniciador) y el persulfato de amonio (catalizador). Donde las reacciones que ocurren es que el radical persultatoactiva al TEMED, el cual a su vez activa el monómero de acrilamida para que polimerice. Las cadenas de poliacrilamida son entrecruzadas al azar por la bis-acrilamida, formándose una red porosa uniforme, lo cual significa que la porosidad depende de las concentraciones estos monómeros. Mientras más grande sea la concentración de poliacrilamida el poro es más pequeño que sirve para analizar moléculas debajo peso
molecular. El porcentaje utilizado de poliacrilamida/bis-acrilamida determina la separación del gel. (5)
5. http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/lab-bioq-gen/archivos/Lomonte%20-%20Cap13%20PAGE.pdf
La electroforesis puede clasificarse en nativa o desnaturalizante, esto se basa de acuerdo al estado de las proteínas a lo largo del proceso:
Electrolisisdesnaturalizante: es la más común, somete a las proteínas a migración asegurando la completa desnaturalización (perdida de estructura tridimensional). La migración es proporcional a la carga y al tamaño de la molécula pero no a su forma. El agente empleado para desnaturalizar es sodio de silsulfuro o SDS, un detergente.
Electrolisis nativa: es la que somete a las proteínas a migración sin desnaturalización....
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