electroforesis
Páginas: 6 (1368 palabras)
Publicado: 30 de octubre de 2013
INTRODUCCIÓN
La electroforesis es una técnica de separación que puede ser utilizada con fines analíticos y que fue introducida por el químico sueco Arne Tiselius.El interés principal de este investigador fue la química de las proteínas séricas y por su trabajo pionero en este campo recibió el premio nobel en 1948.
Entre 1940 y 1960 sobrevino un desarrollo de la electroforesis, aplicándose adiversas moléculas desde proteínas grandes hasta aminoácidos e iones inorgánicos. A la electroforesis de zona se sumaron además el isoelectroenfoque y la isotacoforesis, basadas en diferentes propiedades físicas. Esto permitió realizar análisis separados en una misma muestra o bien realizar combinaciones de métodos.
La distinción entre los métodos se da a nivel de las matrices empleadas, así sehan usado geles de polímeros, papel y capilares.
En 1955 Smithies introdujo el uso de geles de almidón y dos años más tarde Kohn uso acetato de celulosa. En 1959 Ornstein y Davis y Raymond y Weintraub usan un gel de poliacrilamida. Los capilares fueron introducidos por Jorgenson y lukacs a principios de los 80.
Las técnicas de detección han evolucionado con los años también. Algunas de estastécnicas incluyen el teñido químico, técnicas inmunoelectroforeticas, análisis bidimensional y varias técnicas de inmovilización en membranas.
Hoy la electroforesis se aplica principalmente al análisis de muestras biológicas. Es ampliamente usada en análisis de ADN para química forense y en la investigación biológica.
LA ELECTROFORESIS
CONCEPTO
Es una técnica para la separación de moléculassegún la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.
FUNDAMENTOS DELA ELECTROFORESIS
Alta sensibilidad, resolución y versatilidad.
Método de separación de ácidos nucleicos, proteínas y otras biomoléculas
Entrega criterio de pureza
Separa mezclascomplejas
Permite determinar: PM de una proteína, punto isoeléctrico, número de cadenas polipectídicas de una proteína.
Migración de solutos en un campo eléctrico.
Las partículas se mueven en base a: su carga neta, peso molecular, estructura tridimensional.
Las Biomacromoléculas poseen carga eléctrica grupos catiónicos y aniónicos disociables.
CARACTERISTICAS
La variante de uso más común para elanálisis de mezclas de proteínas o de ácidos nucleicos utiliza como soporte un gel, ya sea de agarosa o de poliacrilamida.
Los ácidos nucleicos ya disponen de una carga eléctrica negativa que los dirigirá al polo positivo, mientras que las proteínas se cargan al unirse con sustancias como el SDS (dodecilsulfato sódico)que incorpora cargas negativas de una manera dependiente de la masa molecular dela proteína.
La migración es proporcional a la carga neta, el tamaño y la forma de la proteína.
Los geles son químicamente inertes, transparentes y estables en un amplio rango de pH, temperatura y fuerza iónica.
Los geles de poliacrilamida (PAGE) se forman por la polimerización de la acrilamida por acción de un agente entrecruzador, la bis-acrilamida, en presencia de un iniciador (TEMED (N,N, N, N’-tetrametilnediamina) y como catalizador el ión persulfato (S2O8), que se añade en forma de persulfato amónico.
CLASES DE ELECTROFORESIS
Electroforesis en geles de gradientes.-
El uso de geles de poliacrilamida que tienen un gradiente creciente de concentración de archilamida + bisacrilamida, y en consecuencia un gradiente decreciente en el tamaño del poro, pueden tener ventajassobre los geles de concentraciones uniformes de acrilamida. En un gel en gradiente la proteína migra hasta alcanzar una zona donde el tamaño de poro impida cualquier avance. Una vez se alcanza el límite del poro no se produce una migración apreciable aunque no se detiene completamente. Una de las ventajas de este tipo de geles es que resuelve mejor las bandas pues las concentra en regiones más...
La electroforesis es una técnica de separación que puede ser utilizada con fines analíticos y que fue introducida por el químico sueco Arne Tiselius.El interés principal de este investigador fue la química de las proteínas séricas y por su trabajo pionero en este campo recibió el premio nobel en 1948.
Entre 1940 y 1960 sobrevino un desarrollo de la electroforesis, aplicándose adiversas moléculas desde proteínas grandes hasta aminoácidos e iones inorgánicos. A la electroforesis de zona se sumaron además el isoelectroenfoque y la isotacoforesis, basadas en diferentes propiedades físicas. Esto permitió realizar análisis separados en una misma muestra o bien realizar combinaciones de métodos.
La distinción entre los métodos se da a nivel de las matrices empleadas, así sehan usado geles de polímeros, papel y capilares.
En 1955 Smithies introdujo el uso de geles de almidón y dos años más tarde Kohn uso acetato de celulosa. En 1959 Ornstein y Davis y Raymond y Weintraub usan un gel de poliacrilamida. Los capilares fueron introducidos por Jorgenson y lukacs a principios de los 80.
Las técnicas de detección han evolucionado con los años también. Algunas de estastécnicas incluyen el teñido químico, técnicas inmunoelectroforeticas, análisis bidimensional y varias técnicas de inmovilización en membranas.
Hoy la electroforesis se aplica principalmente al análisis de muestras biológicas. Es ampliamente usada en análisis de ADN para química forense y en la investigación biológica.
LA ELECTROFORESIS
CONCEPTO
Es una técnica para la separación de moléculassegún la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.
FUNDAMENTOS DELA ELECTROFORESIS
Alta sensibilidad, resolución y versatilidad.
Método de separación de ácidos nucleicos, proteínas y otras biomoléculas
Entrega criterio de pureza
Separa mezclascomplejas
Permite determinar: PM de una proteína, punto isoeléctrico, número de cadenas polipectídicas de una proteína.
Migración de solutos en un campo eléctrico.
Las partículas se mueven en base a: su carga neta, peso molecular, estructura tridimensional.
Las Biomacromoléculas poseen carga eléctrica grupos catiónicos y aniónicos disociables.
CARACTERISTICAS
La variante de uso más común para elanálisis de mezclas de proteínas o de ácidos nucleicos utiliza como soporte un gel, ya sea de agarosa o de poliacrilamida.
Los ácidos nucleicos ya disponen de una carga eléctrica negativa que los dirigirá al polo positivo, mientras que las proteínas se cargan al unirse con sustancias como el SDS (dodecilsulfato sódico)que incorpora cargas negativas de una manera dependiente de la masa molecular dela proteína.
La migración es proporcional a la carga neta, el tamaño y la forma de la proteína.
Los geles son químicamente inertes, transparentes y estables en un amplio rango de pH, temperatura y fuerza iónica.
Los geles de poliacrilamida (PAGE) se forman por la polimerización de la acrilamida por acción de un agente entrecruzador, la bis-acrilamida, en presencia de un iniciador (TEMED (N,N, N, N’-tetrametilnediamina) y como catalizador el ión persulfato (S2O8), que se añade en forma de persulfato amónico.
CLASES DE ELECTROFORESIS
Electroforesis en geles de gradientes.-
El uso de geles de poliacrilamida que tienen un gradiente creciente de concentración de archilamida + bisacrilamida, y en consecuencia un gradiente decreciente en el tamaño del poro, pueden tener ventajassobre los geles de concentraciones uniformes de acrilamida. En un gel en gradiente la proteína migra hasta alcanzar una zona donde el tamaño de poro impida cualquier avance. Una vez se alcanza el límite del poro no se produce una migración apreciable aunque no se detiene completamente. Una de las ventajas de este tipo de geles es que resuelve mejor las bandas pues las concentra en regiones más...
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