Electroforesis
Páginas: 22 (5382 palabras)
Publicado: 28 de julio de 2012
Electroforesis
La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.
La técnica clásica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un electrolito. Sus extremos sesumergen en dos depósitos independientes que contienen ambos al electrolito y están unidos a los electrodos del generador de corriente. La muestra se deposita en forma de un pequeño trazo transversal en la tira. La distancia de migración se mide en relación un marcador interno. Las placas son reveladas con sales de plata, azul de Coomassie, o reactivos en particular.
Movilidad electroforéticaLa interacción entre fuerzas eléctricas de repulsión y atracción permiten la movilidad electroforética. A continuación se muestra la relación de estas fuerzas con la movilidad electroforética: Fe = (E / d) * q
Donde Fe indica la fuerza eléctrica de atracción, E indica el potencial, d la distancia que separa los electrodos y q la carga.
(E / d) = representa la fuerza del campo y es constante.Fr = 6Π rη v
Donde Fr es la fuerza de repulsión o rozamiento, r el radio de la molécula, η viscosidad del medio v la velocidad de la partícula o molécula en el medio.
Al igualar las fuerzas se tiene: (E / d)* q =Fr = 6Π rη v
La relación (v / E) reconocida como movilidad electroforética(µi ) equivale a:
q / 6Π rη d
La expresión (1/ 6Π η d) es constante (K) en las corridaselectroforéticas por ende la movilidad electroforética se reduce a:
µi = K*x q/M
Donde M refiere al peso molecular. Se sustituye ya que existe relación directa entre el radio y la masa de la partícula. La velocidad de migración de un ion,v, en centímetros por segundo, en el seno de un campo eléctrico, es igual al producto de la intensidad del campo eléctrico E (Vcm-1) por la movilidad electroforéticaµe (cm2V-1s-1), esto es:
V=µeE
La movilidad electroforética es directamente proporcional a la carga eléctrica del analito e inversamente proporcional a los factores de retardo por rozamiento. El campo eléctrico actúa solamente sobre los iones; si dos especies difieren bien en la carga o en la fuerza de rozamiento, se moverán a través del tampón y se separarán. Las especies neutras no seseparan. La fuerza de retardo por rozamiento se determina en un analito cargado, a partir del tamaño y de la forma del ion y de la viscosidad del medio en el cual migra. Para iones del mismo tamaño la fuerza impulsora será mayor, en el de mayor carga, y tendrá una velocidad de migración más rápida. Para los iones que presenten la misma carga la fuerza de retardo por rozamiento será más pequeña, en elion más pequeño y tendrá una velocidad de migración más rápida. La relación carga-tamaño de los iones combina estos dos efectos.
Técnicas Electroforéticas
* Electroforesis capilar en zona o en disolución libre (CZE): Es el procedimiento de electroforesis más habitual, en el cual el capilar es recorrido por el electrolito a través de un medio buffer que puede ser ácido (fosfato o citrato),básico (borato), o anfótero (carácter ácido y básico). El flujo electroosmótico crece con el pH del medio electroforético. ELECTROFORÉSIS Illán Morales Becerril
* Electroforesis capilar electrocinética micelar (MEKC): En esta variante del procedimiento anterior se añade a la fase móvil un compuesto catiónico o aniónico para formar micelas cargadas. Estas pequeñísimas gotitas inmiscibles conla disolución retienen a los compuestos neutros de un modo más o menos eficaz, por afinidad hidrófila-hidrófoba. Se puede utilizar este tipo de electroforesis para moléculas que tienen tendencia a migrar sin separación, como es el caso de algunos enantiomeros.
* Electroforesis capilar en gel (CGE): Esta es la transposición de la electroforesis en egel de poliacrilamida o de agarosa. El...
La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.
La técnica clásica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un electrolito. Sus extremos sesumergen en dos depósitos independientes que contienen ambos al electrolito y están unidos a los electrodos del generador de corriente. La muestra se deposita en forma de un pequeño trazo transversal en la tira. La distancia de migración se mide en relación un marcador interno. Las placas son reveladas con sales de plata, azul de Coomassie, o reactivos en particular.
Movilidad electroforéticaLa interacción entre fuerzas eléctricas de repulsión y atracción permiten la movilidad electroforética. A continuación se muestra la relación de estas fuerzas con la movilidad electroforética: Fe = (E / d) * q
Donde Fe indica la fuerza eléctrica de atracción, E indica el potencial, d la distancia que separa los electrodos y q la carga.
(E / d) = representa la fuerza del campo y es constante.Fr = 6Π rη v
Donde Fr es la fuerza de repulsión o rozamiento, r el radio de la molécula, η viscosidad del medio v la velocidad de la partícula o molécula en el medio.
Al igualar las fuerzas se tiene: (E / d)* q =Fr = 6Π rη v
La relación (v / E) reconocida como movilidad electroforética(µi ) equivale a:
q / 6Π rη d
La expresión (1/ 6Π η d) es constante (K) en las corridaselectroforéticas por ende la movilidad electroforética se reduce a:
µi = K*x q/M
Donde M refiere al peso molecular. Se sustituye ya que existe relación directa entre el radio y la masa de la partícula. La velocidad de migración de un ion,v, en centímetros por segundo, en el seno de un campo eléctrico, es igual al producto de la intensidad del campo eléctrico E (Vcm-1) por la movilidad electroforéticaµe (cm2V-1s-1), esto es:
V=µeE
La movilidad electroforética es directamente proporcional a la carga eléctrica del analito e inversamente proporcional a los factores de retardo por rozamiento. El campo eléctrico actúa solamente sobre los iones; si dos especies difieren bien en la carga o en la fuerza de rozamiento, se moverán a través del tampón y se separarán. Las especies neutras no seseparan. La fuerza de retardo por rozamiento se determina en un analito cargado, a partir del tamaño y de la forma del ion y de la viscosidad del medio en el cual migra. Para iones del mismo tamaño la fuerza impulsora será mayor, en el de mayor carga, y tendrá una velocidad de migración más rápida. Para los iones que presenten la misma carga la fuerza de retardo por rozamiento será más pequeña, en elion más pequeño y tendrá una velocidad de migración más rápida. La relación carga-tamaño de los iones combina estos dos efectos.
Técnicas Electroforéticas
* Electroforesis capilar en zona o en disolución libre (CZE): Es el procedimiento de electroforesis más habitual, en el cual el capilar es recorrido por el electrolito a través de un medio buffer que puede ser ácido (fosfato o citrato),básico (borato), o anfótero (carácter ácido y básico). El flujo electroosmótico crece con el pH del medio electroforético. ELECTROFORÉSIS Illán Morales Becerril
* Electroforesis capilar electrocinética micelar (MEKC): En esta variante del procedimiento anterior se añade a la fase móvil un compuesto catiónico o aniónico para formar micelas cargadas. Estas pequeñísimas gotitas inmiscibles conla disolución retienen a los compuestos neutros de un modo más o menos eficaz, por afinidad hidrófila-hidrófoba. Se puede utilizar este tipo de electroforesis para moléculas que tienen tendencia a migrar sin separación, como es el caso de algunos enantiomeros.
* Electroforesis capilar en gel (CGE): Esta es la transposición de la electroforesis en egel de poliacrilamida o de agarosa. El...
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