ElLISA
Páginas: 8 (1769 palabras)
Publicado: 24 de noviembre de 2013
Universidad Panamericana
Laboratorio de Inmunología
Dra. Leticia Rocha
Bazán Acevedo Cynthia Daniela, García Valdez Paola, Muñóz Bolaños Diego Guillermo, Reyes Mata Ximena Montserrat, Vargas Meouchi Enrique Alberto
Prueba de ELISA
La prueba de ELISA (Enzyme linked inmuno sorbent assay) entra en la categoría de inmunoensayos. Un inmunoensayo incluye pruebas que utilicen anticuerposcomo reactantes. El ELISA es también una prueba enzimática, por lo tanto, utiliza de unión de una enzima y un anticuerpo, creando un conjugado que tiene una actividad dual: tanto inmunológica como enzimática. Se adiciona está unión a un inmunoadsorbente, a una fase sólida, la cual permite que la unión entre la enzima y el anticuerpo quede inmovilizada, y con eso, se le pueda agregar fácilmente unsustrato específico, que cuando actúa con la enzima, produce color, que puede ser observado a simple vista y cuantificable por un espectofotómetro o un colorífero. 1
El uso principal de ésta prueba es el diagnóstico serológico de enfermedades, sin embargo, esta prueba también puede ser utilizada para diagnosticar si se ha estado expuesto a un antígeno específico. 2
En el Esquema 1., semuestran las diferentes ventajas que presenta el uso de la prueba ELISA, considerando su versatilidad, simpleza, sensibilidad y forma de cuantificación.
Esquema 1. Características del ELISA.3
Existen diferentes tipos de ELISAs, con diferentes usos clínicos y variaciones en su procedimiento, sin embargo, todos siguen estas etapas en común:
Sensibilización de la placa
Bloqueo de espacios vacíos.Fijar el anticuerpo a una superficie
Aplicación del espécimen de prueba
Detección al anticuerpo marcado
Incubación con la muestra.
Incubación con el sistema de detección.
Adición del sustrato
Hay que considerar que la fase sólida, en la que se llevará a cabo la reacción, tiene que ser de fácil manejo, y debe permitir que esta unión se realice de forma fácil. La adhisión de todos losreactivos se hace de forma individual y con un proceso de lavado entre cada una (por eso es importante que la ase sólida sea de fácil manejo). La adhisión de sustratos puede llevarse a cabo por medio de una micropipeta.
La enzima que se utiliza debe unirse de forma fácil al anticuerpo. En la Tabla 1., se muestran los coloríferos utilizados en con enzima fosfatasa alcalina y peroxidasa.
Tabla1. Coloríferos utilizados en fosfatasa alcalina y peroxidasa.
El sustrato utilizado debe tener las siguientes características: alta especificidad, alta sensibilidad, alta repetibilidad, fácil lectura, baja complejidad de preparación y alta estabilidad.
Las diferentes pruebas de ELISA que existen son:
ELISA Directo
ELISA Indirecto
ELISA Sandwich
ELISA Competitivo
ELISA Directo
Sigue lasetapas que se mencionaron, y que son comunes en todos los diferentes tipos de ELISA.
ELISA Indirecto
Su característica, es que agrega de inicio, el anticuerpo, luego el sustrato con el cual va a reaccionar. Después agregas un anti-anticuerpo conjugados con una enzima, la cual reaccionará con los anticuerpos que se unieron previamente a su antígeno.
ELISA Sandwich
En esta variación, primeroagregas la solución con el antígeno, que se pegará a los anticuerpos de la placa, después agregas anticuerpos que serán específicos del antígeno, y después agregas antianticuerpos, que son específicos al anticuerpo del paso previo.4.
Eritropoyetina recombinante humana
La eritropoyetina recombinante humana surgió de la clonación del gen de Eritropoyetina fisiológica, que permitió susíntesis.
La Eritropoyetina fisiológica es una glucoproteína de 35 kD, su gen se encuentra en el cromosoma 7, y es sintetizada en las células epiteliales tubulares del riñón. Su principal estímulo es la hipoxia tisular.
La eritropoyetina se encarga de estimular la eritropoyesis a distintos niveles:
Aumenta la diferenciación eritrocitaria
Estimula la síntesis de hemoglobina
Estimula la salida...
Laboratorio de Inmunología
Dra. Leticia Rocha
Bazán Acevedo Cynthia Daniela, García Valdez Paola, Muñóz Bolaños Diego Guillermo, Reyes Mata Ximena Montserrat, Vargas Meouchi Enrique Alberto
Prueba de ELISA
La prueba de ELISA (Enzyme linked inmuno sorbent assay) entra en la categoría de inmunoensayos. Un inmunoensayo incluye pruebas que utilicen anticuerposcomo reactantes. El ELISA es también una prueba enzimática, por lo tanto, utiliza de unión de una enzima y un anticuerpo, creando un conjugado que tiene una actividad dual: tanto inmunológica como enzimática. Se adiciona está unión a un inmunoadsorbente, a una fase sólida, la cual permite que la unión entre la enzima y el anticuerpo quede inmovilizada, y con eso, se le pueda agregar fácilmente unsustrato específico, que cuando actúa con la enzima, produce color, que puede ser observado a simple vista y cuantificable por un espectofotómetro o un colorífero. 1
El uso principal de ésta prueba es el diagnóstico serológico de enfermedades, sin embargo, esta prueba también puede ser utilizada para diagnosticar si se ha estado expuesto a un antígeno específico. 2
En el Esquema 1., semuestran las diferentes ventajas que presenta el uso de la prueba ELISA, considerando su versatilidad, simpleza, sensibilidad y forma de cuantificación.
Esquema 1. Características del ELISA.3
Existen diferentes tipos de ELISAs, con diferentes usos clínicos y variaciones en su procedimiento, sin embargo, todos siguen estas etapas en común:
Sensibilización de la placa
Bloqueo de espacios vacíos.Fijar el anticuerpo a una superficie
Aplicación del espécimen de prueba
Detección al anticuerpo marcado
Incubación con la muestra.
Incubación con el sistema de detección.
Adición del sustrato
Hay que considerar que la fase sólida, en la que se llevará a cabo la reacción, tiene que ser de fácil manejo, y debe permitir que esta unión se realice de forma fácil. La adhisión de todos losreactivos se hace de forma individual y con un proceso de lavado entre cada una (por eso es importante que la ase sólida sea de fácil manejo). La adhisión de sustratos puede llevarse a cabo por medio de una micropipeta.
La enzima que se utiliza debe unirse de forma fácil al anticuerpo. En la Tabla 1., se muestran los coloríferos utilizados en con enzima fosfatasa alcalina y peroxidasa.
Tabla1. Coloríferos utilizados en fosfatasa alcalina y peroxidasa.
El sustrato utilizado debe tener las siguientes características: alta especificidad, alta sensibilidad, alta repetibilidad, fácil lectura, baja complejidad de preparación y alta estabilidad.
Las diferentes pruebas de ELISA que existen son:
ELISA Directo
ELISA Indirecto
ELISA Sandwich
ELISA Competitivo
ELISA Directo
Sigue lasetapas que se mencionaron, y que son comunes en todos los diferentes tipos de ELISA.
ELISA Indirecto
Su característica, es que agrega de inicio, el anticuerpo, luego el sustrato con el cual va a reaccionar. Después agregas un anti-anticuerpo conjugados con una enzima, la cual reaccionará con los anticuerpos que se unieron previamente a su antígeno.
ELISA Sandwich
En esta variación, primeroagregas la solución con el antígeno, que se pegará a los anticuerpos de la placa, después agregas anticuerpos que serán específicos del antígeno, y después agregas antianticuerpos, que son específicos al anticuerpo del paso previo.4.
Eritropoyetina recombinante humana
La eritropoyetina recombinante humana surgió de la clonación del gen de Eritropoyetina fisiológica, que permitió susíntesis.
La Eritropoyetina fisiológica es una glucoproteína de 35 kD, su gen se encuentra en el cromosoma 7, y es sintetizada en las células epiteliales tubulares del riñón. Su principal estímulo es la hipoxia tisular.
La eritropoyetina se encarga de estimular la eritropoyesis a distintos niveles:
Aumenta la diferenciación eritrocitaria
Estimula la síntesis de hemoglobina
Estimula la salida...
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