ensayo

Revista Medica Herediana
versión On-line ISSN 1729-214X
Rev Med Hered v.14 n.4 Lima oct. 2003
 
Obtención de ácido desoxirribonucleico (ADN) útil para análisis genético, a partir de uñas recortadas
Cervantes Gonzales, Jorge Luis*
*Médico egresado de la Universidad Peruana Cayetano Heredia
Departamento de Virología, Facultad de Medicina - Universidad de Kagoshima, Kagoshima Japón.
SUMMARYObtaining deoxyribonucleic acid (DNA) is the starting point for most genetic analysis. Nails are an accessible source of DNA. The present communication reports the successful extraction of genomic DNA from fresh nails, as well as from nails collected a month before the extraction. Amplification in two different regions of the human beta-globin gene was achieved by of the polymerase chainreaction. The described method, is a simple, non invasive method. Nail clipping material may be considered a convenient material for genetic analysis. (Rev Med Hered 2003; 14:230-233).
KEY WORDS: DNA, nails, beta-globin.
INTRODUCCION
La biología molecular es una de las herramientas más utiles de las que se vale hoy en día la ciencia y la medicina moderna. La obtención de ácido desoxirribonucleico(ADN), es el punto de partida para la mayoría de análisis genéticos; incluso contando con pequeñas cantidades de ADN, es posible amplificar genes específicos in vitro a través de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en Inglés : Polymerase Chain Reaction) (1). Esta revolucionaria técnica le valio a su inventor, Kary B. Mullis, el premio Nobel de química en 1993.
En algunascircunstancias, cuando no es posible obtener muestras de sangre, el ADN obtenido a partir de cabellos o bulbos capilares puede ser utilizado para análisis genéticos (2). Tomar una muestra de cabello es sencillo, permite el muestreo de un gran número de sujetos en menor tiempo, con un mínimo de aflicción causada (3). Sin embargo extraer un cabello (junto con el bulbo capilar) puede ser doloroso enalgunas situaciones, e imposible en animales de laboratorio carentes de pelaje(4).
Las uñas son otra fuente accesible de ADN. Son especialmente útiles en casos en lo que se ha realizado transplante alogénico de médula ósea, y se necesita identificar el origen de las células hematopoyéticas post-transplante, y donde debido al reemplazo de las células sanguíneas, debe obtenerse ADN de muestras distintasa la sangre periférica (5). Es también de invalorable utilidad en casos de medicina forense, donde el material de evidencia, y única fuente de ADN son uñas (6).
El presente reporte describe la extracción de ADN a partir de uñas recortadas, y su utilización en la amplificación de una porción del gen de b-globina humana.
MATERIAL Y METODOS
Extracción de ADN
Se obtuvieron uñas de un adultomasculino de 30 años, utilizando un corta uñas ordinario, previamente sumergido en etanol al 70%. Aproximadamente 150 mg de uñas recortadas fueron incubadas a 55oC por 72 horas en una solución de lisis, conteniendo 2ml de EDTA 0.5 M, pH 8.0 (Nacalai Tesque Inc., Japan), 200 ml de proteinasa K (20 mg/ml)(Boehringer Mannheim, Germany), y 200 ml de una solución al 10% de dodecil sulfato de sodio (SDS)(Valley Biomedical Inc., USA). Luego de la digestión, el ADN fue extraído del sobrenadante utilizando columnas conteniendo una matriz de fibra de vidrio (7,8) (GFX Genomic Blood Purification Kit, Amersham Pharmacia Biotech), de acuerdo a las instrucciones del fabricante.
Concentración de DNA
La concentración de DNA fue calculada utilizando un espectofotómetro (Gene Quant II, Pharmacia Biotech), apartir de densidad óptica de lectura a 260 nm.
Amplificación del gen de beta-globina humana
El ADN extraído fue utilizado para amplificar una región de 262 pares de bases (pb) del exon 1 del gen de b-globina humana utilizando los cebadores ("primers")
KM 29 (5‘-GGTTGGCCAATCTACTCCCAGG -3’) y KM38 (5‘-TGGTCTCCTTAAACCTGTCTTG -3‘) (1). El protocolo de amplificación en un volumen de 50 ml, incluye...