Enzimas

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UNIVERDIDAD DE EL SALVADOR
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA

Resumen bibliográfico para la práctica de laboratorio:
“Actividad de la enzima citocromo oxidasa en tejidos de rata”
Alumna: Rosa Alicia Sandoval Guillen
Laboratorio: 4
Materia: Bioquímica I
Ciclo I 2011

Ciudad universitaria, 5 de mayo de2011
Enzima Citocromo Oxidasa

El tipo de enzimas transportadoras de electrones son los citocromo que tienen ferroporfirina como grupo prostético.
Cada tipo de citocromo en estado reducido exhibe tres bandas de absorción características en el espectro de luz visible, a, b, y g o Soret.
Enzima que cataliza el último pasó en la cadena de transporte electrónico.
Está formada por un dímero quese extiende desde la matriz hasta el espacio intermembrana o el citosol, atravesando la membrana.

Precursor/es Enzima / Proceso Producto/s Ciclo

Fe+++  Citocromo oxidasa  Fe++  Ruta 8: Ciclo de Krebs

Estructura
Estructuralmente, el complejo IV es unaproteína integral de membrana que incluye varios grupos prostéticos metálicos así como 13 subunidades, en mamíferos. De estas 13, diez están codificadas por genes situados en el genoma nuclear y tres en el mitocondrial. El complejo posee dos grupos hemo, un citocromo a y otro a3, así como dos centros de cobre (uno denominado CuA y el otro CuB centers.[2] En realidad, el citocromo a3 y el CuBforman un centro binuclear en el cual se produce la reducción del oxígeno molecular a agua.
El citocromo c, elemento anterior en la cadena de transporte de electrones (que está reducido mediante el complejo citocromo bc1, también denominado complejo III), se une a la citocromo c oxidasa en un lugar cercano al centro binuclear. Al acercarse, cede un electrón, se oxida y regresa por tanto a su estadoFe+3. El CuA del complejo IV, que es quien acepta ese electrón, lo cede a su vez al citocromo a, y éste al centro binuclear citocromo a3- CuB. En este último complejo los dos metales, el átomo de hierro y el de cobre, se encuentran a 4.5 Å de distancia entre sí y coordinan un ion hidróxido completamente oxidado.
La cristalografía de rayos X arroja una inusual modificación postraduccional de lacitocromo c oxidasa: el C6 de la Tyr 244 y el ε-N de la His 240 (numeración del complejo en bovino). Este enlace es esencial en la acepción de cuatro electrones del complejo binuclear, pues son precisos estos cuatro para reducir el O2 a dos moléculas de agua. El mecanismo de reducción podría estar basado en un estado intermediario peróxido, que daría lugar a la producción de radicales superóxido; lahipótesis más aceptada es la rápida reducción del oxígeno molecular por acepción de los cuatro electrones, lo que redundaría en la ruptura del enlace oxígeno-oxígeno.

PRUEBA OXIDASA

En microbiología la prueba de la oxidasa se utiliza como una característica fenotípica en la identificación de cepas bacterianas pues determina si la bacteria produce citocromo oxidasa (y por lo tanto utilizaoxígeno en la cadena de transporte de electrones. Las bacterias que deben utilizar oxígeno se denominan aerobias, y las que pueden utilizar oxígeno pero también otros compuestos se denominan anaerobias facultativas.

La prueba de la oxidasa se usa sobre todo para
* Identificar todas las especies de Neisseria (+)
* Diferenciar Pseudomonas de los miembros oxidasa negativos de lasenterobacterias.
El reactivo de la oxidasa más recomendado es la solución acuosa al 1% de diclorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina (reactivo de Kovacs). Es menos tóxico y mucho más sensible que el correspondiente compuesto dimetilo (reactivo de Gordon y McLeod), pero es más caro. Este reactivo tiñe las colonias oxidasa positivas de color lavanda que vira gradualmente a púrpura-negruzco intenso....
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