enzimas







Reconocimiento y cuantificación de las proteínas








Integrantes: Galarce Escobar Claudia
Salas Moya Felipe
Vilches Pérez Natalie
Sección: 1.2
Profesor: Javiera Norambuena

INTRODUCCIÓN
En nuestro organismo existen moléculas denominadas macromoléculas, dentro de este grupo se encuentra uno muy particular e importantísimo para la vida de un individuo; lasproteínas, estas son las moléculas más abundantes en las células vivas y su tamaño puede variar sustancialmente, ya que los aminoácidos, su unidad estructural y funcional, son capaces de formar grandes cadenas de polímeros o estructuras globulares gracias a la estabilidad del enlace peptídico, típico en estas moléculas. Las proteínas poseen diferentes funciones como transporte, almacenaje,movimiento, protección inmunológica, entre otras. Sin duda, las proteínas juegan un papel vital en las reacciones biológicas, cumpliendo importantes funciones dentro de cada individuo. Por la importancia de las proteínas, es útil tener un control para reconocerlas, cuantificarlas, separarlas, etc. Para esto existen varios métodos y procesos. Para cuantificar proteínas tenemos la espectrofotometría,este método consiste en medir la absorbancia de una sustancia en un espectrofotómetro que hace pasar un haz de luz ultravioleta (280 y 540 nm) por parte de la muestra indicando un valor, dicho valor será la concentración de proteínas en la solución, a su vez, absorbancia se define como la medición de la capacidad de absorción de una radiación por la sustancia a investigar, siendo ésta una magnitudadimensional. La ley de Lambert expresa que la cantidad de radiación absorbida (A) es proporcional a la absortividad (a) de la muestra y al trayecto óptico. La ley de Beer expresa la relación entre la absorción de la muestra y la concentración de la sustancia problema en la muestra, con longitud de onda y trayecto óptico constantes (1). La combinación de estas dos leyes constituye la ley deLambert-Beer que resume ambas leyes como la relación proporcional entre la absorbancia de una muestra y su concentración. Con los datos proporcionados será posible conocer algunos métodos de reconocimiento y cuantificación de las proteínas y sus fundamentos teóricos. Además aprender los conceptos teóricos relacionados a la espectrofotometría y cómo éstos son aplicados en el laboratorio para lacuantificación de proteínas.

MATERIALES Y MÉTODOS

Se utilizaron dos métodos para el reconocimiento de proteínas:
Uno fue el reconocimiento por absorbancia a 280nm de luz ultravioleta, este método consistió en utilizar 3 tubos de ensayo, al primero se le agregó 3mL de plasma (ovoalbúmina) diluido 1:80, al segundo se le agregó 3mL de SAB (seroalbúmina de bovino) 5mg/mL, y al tercero se le agregó 3mLde NaCL 0,9% p/v. Luego las muestras se dispusieron en cubetas de cuarzo para ser leídas en el espectrofotómetro (modelo: SP-2000UV, marca: spectrum). La primera cubeta de cuarzo en disponerse en el espectrofotómetro fue la que contenía NaCL, ya que esa era nuestra muestra “blanco”, con esta se calibró en 0 el espectrofotómetro. Luego se dispuso la cubeta que contenía SAB, la cual arrojó unaabsorbancia de 1.700 y la tercera cubeta que contenía plasma diluido arrojó una absorbancia de 0.590
Luego de obtener estos resultados para calcular la concentración ([ ]) de proteínas en el plasma diluido se realizó una regla de tres con la que se obtuvo en la concentración de nuestra muestra, pero esta al estar diluida 1:80 se tuvo que multiplicar por 80 para obtener la concentración de proteínasen el plasma sin diluir y luego se dividió en 100 para que nuestra concentración quedara expresada en mg/dL.
El segundo método utilizado fue por absorbancia a 540nm (reactivo de Biuret), este método consistió en la utilización de 7 tubos de ensayo, aplicándole a cada uno cantidades distintas de NaCL 7% p/v, SAB 5mg/mL, plasma diluido 1:80 y reactivo de Biuret.
Al tubo 1 sólo se le agregó 2.0mL...