enzimas



Trabajo
Practico n°2
Actividad enzimática





I. Introducción
“Prácticamente todas las reacciones bioquímicas, que son a base de la vida, requieres ser catalizadas de modo específico y regulado; este es el papel que cumplen las enzimas”. (Peña, Arroyo, Gómez, Tapia, Gómez.2004)
“Los catalizadores son sustancias capaces de aumentar la velocidad de una reacción mediante su participación enella, y cuya estructura química no ha cambiado al final de la misma. En otras palabras, un catalizador interviene en una reacción para que esta ocurra más rápidamente, y una vez que la reacción se ha completado, queda tal como estaba al principio. La alta velocidad requerida en las reacciones bioquímicas en el interior de la célula se alcanza por catalizadores, que podemos calificar comocatalizadores biológicos, y que reciben el nombre de enzimas. Las enzimas son extraordinariamente eficientes y pueden acelerar las reacciones hasta varios miles de veces, lo cual es fundamental para la vida de la célula. Gracias a la gran capacidad catalizadora o catalítica de las enzimas se puede alcanzar en las reacciones la velocidad necesaria para el aprovechamiento de la energía y la reacción de susmúltiples funciones“. (Peña,Arroyo,Gomez,Tapia,Gomez.2004)
En este informe veremos las reacciones de la enzima salival a distintas temperaturas y pH midiendo su absorbancia y su capacidad como catalizador.
II. Objetivos
Determinar la concentración de almidón de cada tubo los cuales son expuestos a distintas condiciones como temperatura, pH para determinar la actividad enzimática en cada uno deellos.
III. Hipótesis
La concentración de almidón es directamente proporcional a su coloración.
El aumento en la velocidad de la reacción enzimática tiene directa relación con el aumento de temperatura.
Enzima ionizada a bajos pH y enzima des-ionizada a altos pH
IV. Materiales y métodos
• 1 Gradilla
• 10 Tubos de ensayo.
• 2 Micropipetas (200 y 1000 μl)
• 3 Vasos precipitados.
• Baño de hielo (0°C)
• Baño termorregulador.
• Estufa a 37 ° C
• Cubeta para espectrofotometría.
• Tampón a 4,7 y pH 10 (37° C
• Solución de almidón al 1%
• Lugol.
• Solución salina fisiológica (0,9%)
• Agua destilada.
• Saliva humana
Para comenzar un voluntario de nuestro grupo junto saliva en un vaso precipitado con 5 ml y diluimos con solución salina fisiológica hasta obtener 15 ml con esto realizamos laslecturas de absorbancia y construimos la curva de calibración para el complejo yodo almidón.
Luego con 5 tubos de 0, 250, 500, 1000 y 1500μl de almidón al 1% y con 500 μl de Lugol completamos hasta 5 ml de agua destilada después de eso calculamos concentración y absorbancia.

Experimento 1:
En este primero experimento tomamos dos tubos de ensayo con 1 ml de almidón a 37°C por dos minutos,después agregamos 1 ml de saliva al primer tubo y al otro suero fisiológico incubamos por 10 min a 37°C, posteriormente agregamos lugol y agua destilada, para luego realizar lectura de absorbancia en el espectrofotómetro.

Experimento 2:
En este experimento tomamos cuatro tubos de ensayo, agregándoles 1 ml de solución de saliva, incubando por 5 min a 0°C, temperatura ambiente, 37°C y 90°C.
Luegoadherimos 1 ml de almidón a cada uno, así dejándolos por 10 min, para completar se agregó 500 μl de lugol y agua destilada para rellenar para así realizar la lectura de absorbancia en el espectrofotómetro.
Experimento 3:
En este experimento en particular queremos determinar el pH sobre la actividad enzimática, por lo tanto aquí, para determinar esto, tomamos tres tubos de ensayo con 1 ml de saliva a pH4, 7 y 10 incubando a 37°C por 5 min
Se agregó a cada tubo almidón al 1% para dejar nuevamente incubada por otros 10 min
Añadimos 500 μl de lugol y completamos con agua destilada para así determinar la concentración de almidón como en los experimentos anteriores.

VI.- Discusión
El lugol se utilizó como colorante en la reacción de degradación de almidón, ya que la concentración del almidón es...