ESTUDIO DE LAS MODIFICACIONES OXIDATIVAS DE LA LIPOPROTEINA DE BAJA DENSIDAD (LDL): ANÁLISIS DE LA OXIDACIÓN DEL COMPONENTE LIPÍDICO Y PROTEICO.








ESTUDIO DE LAS MODIFICACIONES OXIDATIVAS DE LA LIPOPROTEINA DE BAJA DENSIDAD (LDL): ANÁLISIS DE LA OXIDACIÓN DEL COMPONENTE LIPÍDICO Y PROTEICO.








Lorena Berriel, Melani Bertin B1-H1
INDICE:
Cálculos del práctico……………………………………………3
Curva de calibración…………………………….……………. 4
Oxidación lipídica ……………………………………………...5,6,7
Oxidación de carotenoides…………………………………..8,9,10Oxidación de la LDL: electroforesis en agarosa…….10,11


















CÁLCULOS:

. ? = .

=

Relación de LDL:Cu 1:75
[LDL] = 0.1 mg/ml
M= =
M ApoB100= 512x10^3 g/mol
M= = 2x10^-6M
[Cu]= 75 x [LDL]
[Cu]= 75x(2x10^-6M)
[Cu]= 1.5x10^-4 M

Oxidación de carotenoides:
0.1mg/mL 2x10^-6 M
1 mg/ml?
?= 2x10^-5 M (LDL)
Relación 1:75
2x10^-5 M * 75 = 1.5x10^-3 M (carotenoides)



Gráfica de absorbancia en función de concentración de proteínas.
La dosificación del contenido proteico de LDL será realizado a través de la curva de calibración, a través de una concentración proteica conocida [BSA], con el fin de hallar la concentración de ApoB100 (proteína que compone la LDL)
Lagráfica se realizo con los datos que se encuentran en la segunda tabla para poder lograr una línea recta, y poder hallar la pendiente para llevar a cabo los respectivos cálculos.











ε = Pendiente

= = 0.04






[ApoB100]= 4.1mg/Ml









Para estudiar la porción lipídica de la LDL se utilizó el método de Oximetría. El consumo de oxígeno se realiza en unacámara de 4 ml de volumen final a agitación constante.
Previo al registro calibramos el aparato al 100% de oxígeno mediante el burbujeo con pipeta Pasteur durante algunos minutos para saturar con aire la cámara que contiene agua solamente. Una vez estabilizada la medida se llevó a 100% con la perilla de CAL. El 100% depende de la temperatura; nosotros tomamos el valor de 25ºC que se corresponde a258 µM O2 /ml.
El registro se obtiene en unidades de % de oxígeno en función del tiempo. Como sabemos que el 100% corresponde a 258 µM de oxígeno se puede calcular la [O2] y graficarlo en función del tiempo. Mientras se consumen los antioxidantes comienza la fase de iniciación que se traduce en la curva como una caída progresiva en la [O2]. Ésta disminución de oxígeno se hace cada vez más marcaday ésta porción de la grafica corresponde a la fase de propagación.
En este gráfico se muestra solamente la fase de propagación ya que nos olvidamos de prender el agitador al principio del experimento, por este motivo optamos graficar a partir del salto que se observa en los datos. De este modo no podemos saber cual es el tiempo perteneciente a la latencia, pero si la velocidad de consumo deoxigeno. No es posible observar en ésta gráfica la fase de terminación, donde no habría consumo de O2, probablemente debido a limitaciones en tiempo para realizar el práctico.
Con respecto a las fases podemos decir que durante la fase de latencia quien se está reduciendo son los antioxidantes, luego durante la fase de propagación quien se reduce es el LDL y el oxidante en ambas etapas es el Cu.Podemos concluir que la velocidad de consumo de oxigeno va disminuyendo en función del tiempo.
Velocidad=pendiente



Este es un gráfico ideal con sus tres fases: latencia, propagación y terminación.























En este gráfico observamos que existen componentes en la LDL con un pico de absorbancia entre los valores 400-500 nm de λ que corresponde a loscarotenoides de éste donante específico, esto es importante ya que la cantidad y variedad de carotenoides presente en la LDL varía en relación al tipo de dieta que sigue el sujeto.
Vemos también que los antioxidantes se oxidan primero que la LDL ya que tienen un mayor potencial de reducción que ésta, pero una vez que ya se redujeron completamente o que estos son muy escasos se inicia la oxidación de...