Etica

PRACTICA N°02

I. INTRODUCCIÓN:

En general, las bacterias y otros microorganismos son transparentes, lo que dificulta su estudio cuando los exámenes se realizan en fresco. Por esta razón, cuando se quieren conocer los detalles morfológicos es necesario recurrir a tinciones. La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica por algún componentecelular. Existen varios tipos de colorantes, pero los más usados en microbiología son:

a) Sales colorantes

Los colorantes más comúnmente usados son sales que pueden ser de tipo ácido o básico, términos que no indican necesariamente su pH en solución, sino que una parte significativa de la molécula sea aniónica o catiónica. Los colorantes básicos consisten en un catión coloreado unido a unanión incoloro (ej., clorhidrato (-) de azul de metileno (+).Los colorantes ácidos tienen el catión incoloro unido a un anión coloreado. Los colorantes se combinan químicamente con el protoplasma bacteriano; si la célula no ha muerto, el proceso de tinción la mata. Los colorantes básicos tiñen la célula bacteriana uniformemente, a menos que antes sea destruido el ARN del citoplasma.

b)Colorantes liposolubles

Los colorantes liposolubles se combinan con los componentes lipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar la localización de los depósitos de grasa. Ej. Negro Sudán. En algunos casos se usan mordientes con la finalidad de engrosar estructuras muy finas, con el propósito de hacerlas visibles al microscopio óptico; uno de ellos es el ácido tánico que se emplea en lacoloración de flagelos y espiroquetas

OBJETIVOS

* Interpretar el fundamento de las coloraciones en la práctica microbiológica.
* Ejercitar las técnicas de coloración simple y compuesta. y coloración de esporas

Una preparación coloreada exige la sucesión de tres pasos: preparación del extendido, fijación y coloración.

1.- Preparación del extendido:
Debe utilizarse un portaobjetoslimpio y desengrasado. Si el cultivo proviene de un medio líquido, se transfiere con ansa una gota del mismo y se extiende hasta formar una fina película que cubra el centro del portaobjetos.
2.- Fijación
Este segundo paso se efectúa para que los microorganismos queden adheridos al vidrio y no se desprendan del portaobjetos con los lavados a los que hay que someterlos posteriormente. Lafijación coagula las sustancias proteicas de las células, lo cual hace que los microorganismos queden pegados al portaobjetos. Con este procedimiento no mueren todas las bacterias.
Existen dos tipos de fijación: con calor o método de Koch y fijación química. Método
3.- Coloración
En este paso se hacen actuar sobre el preparado ya fijado las soluciones de colorantes de acuerdo al método de tinción quese realice. Para la observación microscópica existen diferentes tipos de coloraciones según las características morfológicas que quieran ponerse de manifiesto. Se clasifican en simples y compuestas.

Se entiende por coloración simple al teñido de los microorganismos aplicando sólo una solución colorante. Pueden ser
* positivas 
* negativas

La coloración positiva:

Es la tinción delos microorganismos, efectuada con colorantes básicos que, como ya dijimos, poseen afinidad por los constituyentes celulares yse combinan químicamente con el citoplasma microbiano.

A) Técnica:

* Se cubre el frotis, después de fijado, con la solución colorante y se deja actuar el tiempo preciso. Luego se lava con agua y se deja secar.

* Con fucsina básica: se diluye 1/10 lasolución de uso (fucsina fenicada de Ziehl) y sedeja actuar 30 a 60 segundos.

* Con violeta de genciana: se diluye al 1/10 la solución de uso y se deja actuar 30 a 60segundos.

* Con azul de metileno: se cubre el preparado con la solución de uso (azul de metileno alcalino de Loeffler) sin diluir y se deja actuar 3 a 5 minutos. El azul de metileno es el colorante más débil de los tres,...