Extracción de adn de tejidos vegetales

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EXTRACCIÓN DE ADN DE TEJIDOS VEGETALES
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PROTOCOLO DE SHAWN CARLSON
 
MATERIALES.
 
DE USOCOMÚN: Agua mineral, sal, bicarbonato, champú, fruta o verdura, isopropanol (frío), azul de metileno, batidora o pasapuré, vasos de precipitados grandes (500 ó 1000 ml), centrífuga, cuchillos, probeta(500 ml), matraces (500 ml), pipeta (5 ml).
 
PARA CADA GRUPO:
0      1 tubo de ensayo grande.
1      2 tubos de ensayo pequeños (para centrífuga).
2      1 pipeta de 10 ml.
3     1 vaso de precipitados pequeño.
4      1 varilla de vidrio.
5      1 pipeta Pateur.
 
MÉTODO.
 
PROCESO | DETALLES | FUNCIÓN |
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Preparación del tampón (común para todoslos grupos). (Se prepará con anterioridad) | 240 ml agua mineral + 3 g de sal + 10 g de bicarbonato + 10 ml de champú. Enfríar a 0º C. | El tampón contiene una concentración muy alta de iones quepermite romper las membranas de las células y del núcleo |
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Preparción del material biológico. Trituración del material biológico, mejor en frío. | Se trocean las verduras, se les añade unpoco de agua y a continuación se trituran utilizando una batidora. Para triturarlo se dan tres pulsos de 10 segundos cada uno.Si es posible hacerlo en frío. | Al triturar las verduras lo que hacemoses romper las membranas de muchas células con lo que liberamos su contenido (orgánulos, núcleos, proteínas, ADN, ARN ...) |
Mezcla del “puré” con el tampón frío. | Se cogen 5 ml del triturado y sedepositan en el tubo de ensayo grande. A continuación se le añaden 10 ml del tampón frío.Se agita VIGOROSAMENTE durante 2 minutos. | Al mezclar el “puré” con el tampón conseguimos que se rompan lasmembranas de las células y de los núcleos sin que se estropee el ADN que queremos obtener.Además el detergente que lleva el tampón ayuda a terminar de romper las membranas de los núcleos celulares en...