Extraccion adn

“Extracción de ADN”
En PCR, el ácido desoxirribonucleico (ADN) es el analito. Por tanto, una buena muestra implica siempre un correcto proceso de obtención de esta molécula a partir de materialbiológico. La extracción de ADN consta de una etapa de lisis, que consiste en romper las estructuras que confinan el citoplasma y liberar al medio su contenido y otra de purificación, que implica laretirada de la solución final de la mayoría de elementos que pueden interferir en la PCR.
De los tres pasos críticos que componen el análisis de patógenos por PCR, la extracción de ADN es quizás el másdesconocido y sobre el que más control podemos ejercer. La extracción del ADN de las células o virus donde se halla confinado es un paso previo en muchos procedimientos analíticos y diagnósticos.
Etapasen la extracción de ADN:
Los pasos necesarios para una correcta extracción y purificación del ADN mediante un procedimiento químico son:
1. Lisis de las células o virus. Las sales caotrópicasayudan a romper la estructura tridimensional de macromoléculas como las proteínas o los ácidos nucleicos consiguiendo su desnaturalización. La adición de un detergente como el SDS es necesaria a menudopara eliminar las membranas.
2. Degradación de la fracción proteica asociada al ADN. Se consigue mediante la adición de una proteasa. La fracción proteica puede precipitarse mejor con la ayuda de salescomo el acetato de amonio o el acetato sódico.
3. Purificación. Consta de 3 fases:
• Precipitación del ADN. El ADN es insoluble en alcohol, por lo que se puede precipitar etanol frío o isopropanol irecuperar mediante una centrifugación. El alcohol del sobrenadante se llevará las sales añadidas previamente.
• Lavado del pellet. Se realiza con alcohol frío volviendo a centrifugarse
•Recuperación. El sedimento se puede resuspender en agua o tampón Tris tras ser secado completamente.
La confirmación de la presencia de ADN se lleva a cabo mediante electroforesis en un gel de agarosa i...