Extraccion de adn

EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE TEJIDOS POR EL MÉTODO ALTAS CONCENTRACIONES DE SALES Y ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA

Moguea Carrascal Audith Paola, Montesino Pérez Ana Milena, & Santos Villadiego Lizeth Katerine.
UNIVERSIDAD DE SUCRE, PROGRAMA DE BIOLOGÍA, INMUNOLOGÍA.

RESUMEN
El proceso de extracción del ADN geonómico sigue ciertas pautas para su correcta purificación que son muydiferentes a los empleados en la purificación de proteínas. Sin embargo cabe resaltar que en general todos los métodos de extracción de ADN consisten en la destrucción y lisis del material celular, seguido de una remoción de proteínas típicamente obtenida por digestión con proteinasa K, y la extracción del ADN usando altas concentraciones de sales, extracción orgánica o la unión del ADN a una fasesólida (intercambio iónico o técnica de silica). Existen varias técnicas que se utilizan para la extracción de ADN; en esta práctica se utilizó el método de altas concentraciones de sales con el fin de extraer material genético de tejidos de murinos.
La electroforesis en gel es una técnica muy utilizada para separar moléculas o fragmentos de moléculas de ácidos nucleicos (ADN o ARN). Tras laelectroforesis, se visualiza el gel con una lámpara de luz UV, y se verán las bandas correspondientes a las muestras de DNA extraídas de los tejidos de los ratones, para comprobar los resultados de la extracción se realizó una electroforesis en la cual se visualizaron las bandas de ADN corridas en el gel de agarosa, en donde los métodos utilizados resultaron ser viables para llevar a cumplir losobjetivos propuestos.

Palabras clave: ADN (ácido desoxirribonucleico), extracción, purificación, electroforesis.

1. INTRODUCCIÓN
El ácido desoxirribonucleico, es una macromolécula que forma parte de todas las células. Contiene la información genética usada en el desarrollo y el funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de algunos virus, siendo el responsable de su transmisiónhereditaria.
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas

del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las células mediante un detergente o un buffer de lisis, vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En esemomento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separadas de él por acción del buffer de lisis. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla tampón y detergente, para lo cual se utiliza etanol frio.Noobstante cabe destacar la técnica que utilizamos para la extracción de ADN, la cual fue el método de altas concentraciones de sales en donde las proteínas y otros contaminantes son precipitados de las células lisadas usando altas concentraciones de sales tales como NaCl (6M). Los precipitados son removidos por centrifugación, y el ADN es recuperado por precipitación con alcohol. En este métodola pureza y rendimiento del producto son variables.
El término electroforesis se usa para describir la migración de una partícula cargada bajo la influencia de un campo eléctrico. Muchas moléculas importantes biológicamente (aminoácidos, péptidos, proteínas, nucleótidos, ácidos nucleicos) poseen grupos ionizables y existen en solución como especies cargadas, bien como cationes, o bien comoaniones. Estas especies cargadas se van a separar en función de su carga cuando se aplica un voltaje a través de los electrodos. Existen muchos tipos de electroforesis, que se engloban en dos categorías fundamentales:
-Electroforesis de frente móvil.
-Electroforesis de zona.
Actualmente, sólo se utiliza la electroforesis de zona, en la cual la muestra se desplaza sobre un soporte sólido, como papel...