Factores que afectan la actividad enzimática





LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
GUIA NO 4.- FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
I. EL PROBLEMA
Estudiar algunos de los factores que afectan la actividad de una enzima.
II. MATERIALESY REACTIVOS
Reactivos:
Solución de alfa amilasa termófila (0,96ml/150ml) en CaCl2(70 ppm)
Solución de almidón soluble(2%)(500ml)
Solución de lugol ( 1%) (250 ml)
Fehling A y fehling B (250 mlde c/u)
Hielo
Buffer fosfatos pH 10
Buffer fosfatos pH 6,5
Buffer fosfatos pH 8
Materiales:
2 Gradillas.
Dos baños maría: 50°C Y 90°C
30 tubos de ensayo
2 pipetas graduadas de 5 ml
6goteros
Pinzas para tubo
4 vasos de precipitados de 100ml

Cronómetro
III. PROCEDIMIENTO
PRUEBA No. 1 EFECTO DE LA TEMPERATURA
Tome 3 tubos de ensayo en cada uno adicione 10 ml de solución dealmidón (agite antes de tomar la solución), 2 ml de solución de buffer pH 6,5 e incúbelos durante 5 minutos a temperaturas diferentes según lo indicado en la tabla No.1. A cada uno de ellos adicione 3gotas de solución de amilasa en CaCl2. Tome 1ml de la mezcla de reacción en los tiempos especificados en la tabla No.1 (desde el tiempo cero) y distribúyalos en dos tubos de ensayo (0,5 mL en cada uno).Un tubo contiene 3 gotas de lugol, anote la coloración y si la reacción es positiva o negativa. Si la prueba es positiva indique el color y la intensidad del color con cruces (+++). El segundo tubocontiene 1mL de Fehling A y 1 mL de Fehling B, coloque los tubos en un baño maría con agua en ebullición por siete minutos, retírelos anote la coloración y la intensidad del color con cruces (+++).Aclare si la prueba es positiva o negativa. Utilice blancos de reactivos para lugol y Fehling.
TABLA N0. 1
TIEMPO DE REACCIÓN
EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA REACCIÓN
MINUTOS
BAÑO DE HIELO (O°C)TUBO 1
50°C
TUBO 2
9O°C
TUBO 3

LUGOL
FEHLING
LUGOL
FEHLING
LUGOL
FEHLING
0






1






2






5






10







PRUEBA No. 2 EFECTO DEL pH EN LA...