factores que afectan la espectrofotometria

DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA.
CURSO PRÁCTICO DE METODOS DE ANALISIS.

NOMBRE:
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx

MATERIA:
MÉTODOS DE ANÁLISIS.

PROFESOR:
ESPINOSA LARA JUANA MERCEDES.

PRÁCTICA:
ESTUDIO DE ALGUNOS FACTORES QUE AFECTAN EL ESTABLECIMIENTO DE UN MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO

GRUPO:
5QM1

SECCION:
3

FECHA DE ENTREGA:
24 DE FEBRERO DE 2012
INTRODUCCIÓN:
La espectrometríaes un método químico que se utiliza para cuantificar la concentración de analítos utilizando la luz. A los métodos que se auxilian con la luz para llevar a cabo un análisis cuantitativo se le conoce como métodos espectrofotométricos, estos pueden tener una sub-clasificación dependiendo de la longitud de onda que utilicen para   el análisis entre los más conocidos están: espectrometría deabsorción visible (colorimetría), ultravioleta e infrarrojo.
Para considerar a un método espectrofotométrico como cuantitativo primero debe de cumplir ciertas reglas como:
El método seleccionado deber ser específico para cuantificar un analíto de nuestro interés.
Que el método esté libre de todas las interferencias posibles al momento de hacer la determinación o en su defecto tratar de controlar lo másposible estas interferencias. 
Debe de tener alta precisión y alta exactitud.
El método debe tener una alta sensibilidad y además el límite de detección debe de corresponder a una concentración baja.
OBJETIVOS:
Selección de tubos comunes de laboratorio para usarlos como cubetas para el espectrofotómetro.
Manejar algunos de los parámetros que intervienen en el establecimiento de un métodoespectrofotómetro.
Establecer las condiciones óptimas de los parámetros probados para la aplicación del método.
RESULTADOS:
1.- Selección de tubos.
TABLA No. 1 SELECCIÓN DE TUBOS COMUNES PARA USARLOS COMO CELDAS.
Tubo No.
%T400
(H2O)
%T400
(NiSO4)
1
95
29
2
95.2
29.2
3
93.8
29.2
4
94.2
29
5
95
28.8
6
93.8
29.4
7
95.3
29
8
95.4
29.4
9
94.2
28.4
10
96.1
28.611
95.2

12
96.2

13
93.2

14
94.6

15
93.7



Superficie óptica equivalente: es una superficie homogénea y paredes con un grosor igual en todo el tubo
Diámetro interno equivalente: es el diámetro que posee el tubo por dentro que permite el paso de luz, y para esta práctica requerimos mantener dicho paso de luz constante para así relacionar de una manera directa la absorbancia conla concentración de una serie de muestras.
2.- Curva de calibración.
TABLA No. 2. CURVA DE CALIBRACIÓN DE Fe3+ POR EL MÉTODO DEL NH4SCN.
Tubo No.
Fe 3+
(µg/ml)
A 480
A ajustada por
regresión lineal
1
0
0
0
2
0.07
0.004
0.0329
3
0.175
0.009
0.0422
4
0.35
0.02
0.0576
5
0.7
0.059
0.0885
6
1.05
0.143
0.1194
7
2.45
0.278
0.2428
8
3.85
0.396
0.3663
9
5.250.572
0.4898
10
6.65
0.702
0.6133
11
8.05
0.792
0.7368
12
9.45
0.81
0.8602
13
10.85
0.875
0.9837

GRAFICA No. 1. CURVA DE CALIBRACION DE Fe3+ POR EL MÉTODO DEL NH4SCN.
La curva sigue la ley de Lambert – Beer, ya que conforme aumenta la concentración de Fierro aumenta la absorbancia, es decir son directamente proporcionales.
El método por NH4SCN, para determinar laconcentración de Fierro presente, es un método muy sensible ya que la concentración mínima, en un espectrofotómetro Genesys, que se puede utilizar para la determinación es de 1.4 microgramos por mililitro.
TABLA No. 3. LIMITE DE DETECCIÓN.
Tubo No.
|Y-Ý|
|Y-Ý|2
1
0
0
2
0.0289
0.00083521
3
0.0332
0.00110224
4
0.0376
0.00141376
5
0.0295
0.00087025
6
0.0236
0.00055696
7
0.0352
0.001239048
0.0297
0.00088209
9
0.0822
0.00675684
10
0.0887
0.00786769
11
0.0552
0.00304704
12
0.0502
0.00252004
13
0.1087
0.01181569

Suma=
0.03890685
TABLA No.4. DATOS PARA APLICAR EL MÉTODO DE RINGBOM EN LA DETERMINACIÓN DE Fe3+ POR EL MÉTODO DEL SCN- .
Tubo No.
Fe 3+ (µg/ml)
Log [Fe3+]
A 480
% T
Absortancia
1
0
0
0
0
0
2
0.07
-1.15490196
0.004
99.0831945...