Flavonoides y compuestos afines

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INVESTIGACIÓN DE FLAVONOIDES Y COMPUESTOS AFINES




1.1 PRUEBAS CUALITATIVAS


Los diferentes tipos de flavonoides se pueden identificar mediante reacciones coloridas y propiedades de solubilidad. Cuando no hay interferencia de pigmentos no flavonoides, el material vegetal se puede ensayar directamente; por ejemplo, si los pétalos blancos de una flor se ponen amarillos en presenciade vapores de amoníaco, deben contener: flavononas y/o flavonoles. Las chalconas y las auronas viran de amarillo a rojo. Los pétalos que contienen antocianinas viran a rojo intenso en presencia de amoníaco. Los extractos acuosos de pigmentos también muestran variaciones en color cuando se les adiciona un álcali; las flavonas y los flavonoles se ponen amarillos, las flavonas eisoflavononas viran a diversos tonos de rojo, las chalconas a púrpura rojizo, los flavonoles a café-anaranjado y las antocianinas a azul.


REACCIÓN DE CIANIDINA

La reacción de cianidina que detecta la presencia del núcleo benzopirónico se emplea debido a que la mayoría de compuestos flavonoides poseen dicho núcleo. Siga el siguiente procedimiento:


Preparación del extracto


1- Tomeun gramo del extracto vegetal y adicione porciones de 15 mL de éter de petróleo y filtre. Repita la trituración del residuo y adicione éter de petróleo como en la parte anterior, hasta que el último volumen de éter de petróleo aparezca incoloro. Descarte los extractos del éter de petróleo. Este es un método que remueve selectivamente los materiales grasos solubles, tales como: clorofila,alquitrán, brea líquida, resinas, etc., y se retienen los flavonoides, los cuales en general no son solubles en éter de petróleo.

2- El residuo libre de sustancias grasas es disuelto en 30 mL de etanol al 80% y filtrado. Use nueve (9) tubos de ensayo y coloque en cada uno de 1 a 2 mL del filtrado.

3- El tubo No. 1 servirá como control (blanco) al que NO se le agregará extracto vegetal, sinoúnicamente los reactivos usados en el test de cianidina.

4- Controles de referencia. Lleve a cabo todas las pruebas con sustancias que puedan servir como controles, tales como: quercetina, rutina, flavona, morín, apigenina, etc. Estas sustancias deben estar en alcohol al 80%.


1.1.1 Test de Cianidina (tubo No. 2)

1- Adicione 0.5 mL de HCl concentrado y 3 ó 4 torneaduras demagnesio.

2- Observe con cuidado cualquier cambio de color (a verde, rojo, etc.) dentro de un periodo de 10 minutos.

3- En caso que aparezca un color definido, compare con el control (tubo No. 1). Enfríe y diluya con un volumen igual de agua destilada y adicione 1 mL de octanol, agite y permita que se separe.

4- Note el color formado en cada capa y anote los resultados.


1.1.2 Test paraLeucoantocianinas


Método A (tubo No. 3)

1- Agregue 0.5 mL de HCl concentrado y caliente sobre un baño de vapor durante 5 minutos.

2- Observe cualquier cambio de color. El desarrollo de un color rojo-violeta indica la presencia de leucoantocianinas.

3- NOTA: si el color no se forma inmediatamente, deje permanecer la solución a temperatura ambiente durante una hora, antesde reportar el resultado como negativo. La formación del color puede ser lenta.

4- Verifique y anote sus resultados.



Método B


1- Agregue 100 mg de su muestra original vegetal seco en un tubo de ensayo.

2- Adicione suficiente HCl 2N en n-propanol de modo que la muestra quede cubierta con el mismo y déjelo en reposo durante 15 a 30 minutos.

3- Observe cualquier cambiode color. El desarrollo de un color fuerte rojo o violeta, indica test positivo.


1.1.3 Prueba de Shinoda (tubo No. 4)

Los extractos alcohólicos o ligeramente amarillos se tratan con un trocito de magnesio y unas pocas gotas de HCl concentrado, observándose de inmediato una coloración anaranjada, roja, roja azulosa o violeta si están presentes flavonas, flavononas, flavonoles,...
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