Fraccionamiento celular

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INTRODUCCIÓN


La centrifugación es un método por el cual se pueden separar sólido de líquidos de diferente densidad mediante una centrifugadora, la cual imprime a la mezcla un movimiento rotatorio con fuerza mayor a la gravedad, provocando la sedimentación de los sólidos o de las partículas de mayor densidad. Dependiendo del líquido que se quiera separar será la velocidad y el tiempo quese sometan.

Existe una serie de centrifugas, según el rango de velocidad de giro:
* Centrífuga de baja velocidad
* Centrífuga de alta velocidad
* Ultracentrífuga

Además se clasifican por la separación de sus partículas:
* Centrifugación zonal (masa)
* Centrifugación isopícnica o al equilibrio (densidad)

Estas pertenecen a la centrifugación mediante un gradiente dedensidades, y por último, y de la misma clasificación:
* Centrifugación fraccionada o diferencial.

¿DE QUÉ SE TRATA?

La centrifugación fraccionada consiste en métodos para la separación y aislamiento de diversos componentes celulares, para su posterior estudio mediante técnicas bioquímicas o de biología molecular. Se basan esencialmente en la homogeneización de los tejidos y la destrucciónde los límites celulares por medio de diferentes procedimientos mecánicos o químicos, para la separación de los componentes celulares de acuerdo con su masa, superficie e incluso su peso en específico.

Actualmente se utilizan diversos métodos de fraccionamiento celular. La mayoría tiene que ver con la homogeneización mecánica de la célula, es decir, tratar de disgregar los tejidos y romper lascélulas, intentando disminuir el daño a la membrana plasmática, ya que al ser homogénea, hay una mezcla de sustancias sin ser visibles sus componentes. Para ello debemos usar otras técnicas como lo es la centrifugación para realizar el fraccionamiento celular, en pocas palabras la centrifugación tiene como función la sedimentación de partículas éste término involucra sustancias disueltas detamaño microscópico y macroscópico que se encuentran suspendidas en un fluido que usualmente es agua. En biología las partículas suelen ser células, organélos subcelulares o moléculas grandes; en química, usualmente son solutos macromoleculares disueltos.

Imagen de un esquema de la diferenciación celular según velocidad.

Para saber más del procedimiento tenemos que saber como es en general unacentrifuga. La centrifuga está compuesta por:

Rotor: Partes donde se colocan los portamuestras.
Portamuestras: Recipiente donde se colocan las muestra. Los portamuestras se deben cargar en el rotor de forma balanceada, para mantener el balance cuando están en movimiento.
Base: Está constituido generalmente de material pesado y con sistema de fijación a la superficie, de modo que brindeestabilidad al equipo normalmente aquí están los controles.
Tapadera: Impide el acceso a las muestras mientras están en movimiento. En la mayoría de los modelos funciona en forma automático, es decir, no puede ser abierto mientras esta en movimiento.

Imagen de un centrifugador.



Existen varios criterios para clasificar las centrífugas, uno de ellos es por la máxima velocidad a la que operan,como por ejemplo:

CENTRÍFUGAS DE BAJA VELOCIDAD
Estas centrífugas son capaces de centrifugar hasta 6 litros de muestra a la vez, mantienen la muestra fría por un flujo de aire que pasa a través del fondo de la centrifuga. Estas máquinas son utilizadas rutinariamente para procesos iniciales de muestras biológicas; puede ser utilizada para separar células.

CENTRÍFUGAS DE ALTA VELOCIDAD
Estascentrífugas, usualmente con máximas velocidades de 18.000 – 25.000 r.p.m (revoluciones por minuto), son máquinas que pueden generar cerca de 60 000 g. Estas centrífugas tienen sistema de refrigeración y algunos tipos tienen también sistema de vacío y controlan con mayor exactitud la temperatura. La ventaja de los rotores verticales ha facilitado el uso de centrífugas de alta velocidad para las...
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