Genetica descriptiva bla bla bla

CENTRO DE CIENCIAS BÁSICAS
DEPARTAMENTO DE: QUIMICA

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

INDICE DE PRÁCTICAS

No.

NOMBRE DE LA PRACTICA

PAG.

1

Uso de material de laboratorio en Biología Molecular

2

2

Extracción de ADN de células eucarióticas

4

3

Purificación, cuantificación y análisis espectrofotométrico del ADN

6

4

Extracción y purificación deplásmidos bacterianos

9

5

Transformación genética de bacterias por choque térmico

11

6

Perfil genético para identificación de individuos

14

7

Digestión enzimática del fago lambda

17

8

Identificación de proteínas específicas por el método de ELISA

20

Código: FO-121500-20 Revisión: 00 Emisión: 16/06/09

PRACTICA No. 1 USO DE MATERIAL DE LABORATORIO EN BIOLOGÍAMOLECULAR

OBJETIVO (S) El alumno: 1. Conocerá los materiales y equipos básicos utilizados en las técnicas de Biología Molecular. 2. Aprenderá el uso correcto de los mismos. 3. Conocerá las reglas de seguridad particulares que se deben utilizar en laboratorio de Biología Molecular.

INTRODUCCIÓN Además del uso de material estándar de un laboratorio (matraces, probetas, pipetas, balanzasanalíticas y granatarias, etc.), cuando se realizan prácticas de Biología Molecular se requiere de usar material y equipo especial. El logro de los objetivos de una práctica depende en buena medida del correcto uso del material y el equipo, además es importante señalar que varios de estos instrumentos resultan delicados y costosos; por todo ello es importante conocer el uso de cada uno de ellos. Dentro deeste equipo especial (aunque no exclusivo) podemos mencionar: a) Micropipetas. Existen varios modelos que operan de manera ligeramente distinta. Existen micropipetas de volumen fijo o variable; en el caso de estas últimas, es muy importante señalar que NUNCA se debe forzar el mecanismo de ajuste para tratar de medir volúmenes superiores o inferiores a la capacidad de la micropipeta, porque noserá posible lograrlo y sólo se conseguirá dañar el equipo; por ejemplo, no se debe intentar ajustar una micropipeta de 100 a 1000 µl para medir un volumen de 60 µl o de 1200 µl. b) Ultracentrífuga o microcentrífuga. Son más pequeñas que las centrífugas convencionales, y solo admiten microtubos con capacidad de 1.5 ó 2 ml. Alcanzan velocidades de hasta 10,000 a 14,000 rpm, dependiendo del modelo. Hayalgunas aún más pequeñas que alcanzan velocidades menores, y solo se utilizan cuando se requieren tiempos y velocidades relativamente pequeños. c) Cámara de electroforesis. Constan de un molde para contener a los geles, propiamente;la cámara incluye otros aditamentos, tales como los peines y empaques para mantener la cámara bien sellada. Este molde se conecta a una fuente de poder, la cual suplede la corriente eléctrica necesaria para desarrollar la corrida electroforética, a través de un par de cables: uno negro (polo negativo) y otro rojo (polo positivo). Es importante cerciorarse de que el voltaje y la resistencia sean los correctos, y que la cámara esté cerrada antes de conectarla a la corriente eléctrica, para evitar accidentes. d) Transiluminador de luz ultravioleta. Lavisualización de los geles de agarosa teñidos con bromuro de etidio requiere de luz ultravioleta. El material incluye puntas para micropipeta, microtubos (“eppendorf”). En el laboratorio de Biología Molecular se trabaja con muestras biológicas (animales, vegetales, cultivos bacteriológicos y otros), y en ocasiones se trabaja con organismos transgénicos. En el caso de las muestras animales y los cultivosbacteriológicos, se deben tener las mismas precauciones que para cualquier otra disciplina que los ocupe, para evitar infecciones o liberar al ambiente a los microorganismos; esto es particularmente importante cuando se trata de virus o bacterias transgénicos,

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Código: FO-121500-20 Revisión: 00 Emisión: 16/06/09

A menudo se utiliza bromuro de etidio (altamente mutagénico y cancerígeno),...