glucosa

Introducción
El hígado es un órgano de almacenamiento de glucógeno (glicógeno) y en entregar glucosa a la circulación, de acuerdo a los requerimientos del organismo. El Glucógeno hepático sintetiza a partir de glucosa (precisamente Glucosa-6-fsfato), en un proceso anabólico denominado glucogénesis y en consecuencia, a partir de otros metabolitos precursores de la molécula de glucosa(gluconeogénesis). La degradación de glucógeno a glucosa-1-P se denomina glucogenolisis y se lleva a cabo en el hígado.
La glucogenólisis puede estudiarse puede estudiarse in vitro, tras incubar cortes del tejido hepático en solución salina, solución de Krebs utilizando reguladores hormonales adrenalina y glucagón para estimular el efecto de la glucogenólisis mientras que el efecto de la hormona insulina esinhibitoria.
La glucogenolisis será evaluada mediante los niveles de glucógeno en el tejido extraido por un aumento paralelo en concentraciones de glucosa en el medio de incubación, mediante métodos de yodo/yoduro y de Somogyi-Nelson.










Metabolismo del Glucógeno en cortes de hígado de rata método yodo/yoduro y Somogyi-Nelson
El proceso catabólico que conduce a la degradaciónde moléculas de glucógeno proporcionando glucosa-1-P se denomina glucogenolisis y se lleva a cabo en el hígado y en mucho menor grado en el riñón.
La degradación catalizada por la enzima glucógeno fosforilasa, usando fosforo inorgánico, hidroliza enlaces glicosidicos-a(1-4) de una glucosa de un extremo no reductor, liberando glucosa-1-fosfato que es convertida posteriormente glucosa-6-fosfatopor acción fosfoglucomutasa, para ingresar a la ruta glicolitica.
La glucogenólisis puede estudiarse puede estudiarse in vitro, incubando cortes del tejido hepático en solución de Krebs y por el aumento paralelo de la d ela concentración de glucosa en el medio de incubación, después de 20 minutos de incubación a 37° C. utilizando reguladores hormonales adrenalina y glucagón para estimular el efectode la glucogenólisis mientras que el efecto de la hormona insulina es inhibitoria.
Materiales y reactivos:
• Batería de tubos de ensayo
• Tubos de centrifuga
• Pipetas parciales
• Muestra: Corte de hígado de rata bien alimentada preparado entre 150 a 250 mg (en hielo),
• Reactivo Nelson
• Reactivo Somogy
• Reactivo Iodo Ioduro
Reactivos para el ensayo de la actividad glucogenolítica
•Solución Salina de Krebs
• Adrenalina 1 mg/ml
• CaCl2 100mM

Reactivos para la desproteneizar en tubo de centrífuga
• Ba(OH)2
• ZnSO4
• H2O destilada



Protocolo experimental:
Preparado de corte de hígado de rata: extraído a 8 y 11 horas en suero fisiológico (NaCl 0.9 %), lavado en tres volúmenes y mantenido a 0° C, cortes relativos entres 150 y 250 miligramos. Corresponde alextracto que contiene cada ensayo.
Los reactivos de actividad glucogenolítica astan dispuestos en los tubos controles. La adición del sustrato (extracto de Hígado) a “tiempo 0” (t0) y “tiempo 30” (T30), respectivamente al tiempo en que se incuban en baño termo regulados a 37°C, al cual corresponden los tubos rotulados t0 y T30, alícuotas de las diversas condiciones del estudio de la glucogenólisis.Extracción en 8 horas:
Condiciones variadas en los reactivos de la actividad glicogenolica
Reactivos para Actividad Glucogenolica Condición N°1; 0.27 mg extracto Condición N°2; 0.26 mg extracto Condición N°3; 0,32 mg extracto Condición N°4; 0.30 mg extracto
Volumen de componentes Volumen de componentes Volumen de componentes Volumen de componentes
Solución de Krebs 2 ml 1.6 ml 1.6 ml 1.2 mlEpinefrina 1 mg/ml - 0.4 ml -- 0.4 ml

CaCl2 100 mM - - 0.4 ml 0.4 ml

Extracción en 11 horas
Condiciones variadas en los reactivos de la actividad glicogenolica
Reactivos para Actividad Glucogenolica Condición N°5 ; 250 mg extracto Condición N°6; 250 mg extracto Condición N°7; 230 mg extracto Condición N°8; 240 mg extracto
Volumen de componentes Volumen de componentes Volumen de...