GUIA DE LABORATORIO DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS

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REACCIONES DE CARACTERIZACION DE AMINOÁCIDOS Y PROTEINAS


OBJETIVOS:
Efectuar algunas reacciones para comprobar la presencia de proteínas.
Comprobar la presencia de algunos aminoácidos en forma libre o haciendo parte de las proteínas con base en las reacciones características de los grupos funcionales de esos aminoácidos.

FUNDAMENTOS:

Para escudriñar si en una determinada muestra biológicahay proteínas pueden utilizarse numerosas reacciones, unas relacionadas con la presencia en la cadena polipeptídica de determinados aminoácidos generalmente triptófano y tirosina o bien basarse en la misma estructura polipeptídica, como es el caso de la reacción del Biuret, propia de las series de al menos 2 enlaces peptídicos contiguos y que, por tanto, permite valorar casi todos los tripéptidos ytodos los péptidos del orden superior incluidas las proteínas.

REACCIÓN DE LA NINHIDRINA:
La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) reacciona con el grupo amino de aminoácidos libres y con los grupos amino de la molécula proteínica para dar un compuesto azul violeta.
Los aminoácidos prolina e hidroxiprolina también reaccionan con la ninhidrina pero en este caso se obtiene un color amarillo enlugar del violeta. La reacción es muy sensible por lo cual se utiliza en cromatografía y en la detección de aminoácidos y proteínas en muestras biológicas.

REACCIÓN DEL BIÚRET:
Cuando una disolución alcalina de sustancias que contienen enlaces peptídicos tales como el Biuret, la oxamida, los polipéptidos y las proteínas, se añade sulfato cúprico, se forman sales complejas de color violeta. Elnombre de “reacción del biuret” proviene de un derivado de la urea, el biuret, que, en condiciones apropiadas, da esta reacción. El biuret se forma en el curso del calentamiento de la urea, con desprendimiento de amoniaco.

El biuret contiene en su molécula dos enlaces amida sucesivos, de modo análogo a las proteínas, donde se presentan numerosos enlaces peptídicos sucesivos. Este biuret enmedio alcalino forma unos complejos de coordinación con el cobre, de color azul morado característico. La reacción es cuantitativa y permite valorar la presencia de proteínas con bastante exactitud e independientemente del tipo de proteína.

REACCIÓN XANTOPROTEÍCA
La reacción xantoproteíca (del griego xanthos, amarillo) permite descubrir en la molécula de proteína la presencia de aminoácidosaromáticos (fenilalanina, tirosina, triptófano).
Estos aminoácidos, al nitrarse, producen un compuesto de color amarillo, característico de los nitrobencenos. No todas las proteínas dan positiva esta reacción ya que en unas pocas la presencia de tirosina, triptófano y fenilalanina es extremadamente baja o nula. Este es el caso de la gelatina derivada del colágeno.

REACCIÓN DE MILLON
Esta reacción sedebe a la presencia, en la molécula de proteína, de la tirosina, que tiene en su composición un grupo fenólico. Este, por calentamiento con el reactivo de Millon (una mezcla de nitrato y nitrito mercúrico disueltos en ácido nítrico concentrado), produce una coloración roja que se debe a la formación de nitrotirosina que, por adición de mercurio en el curso del calentamiento, se transforma en una salmercúrica de color rojo.

RECONOCIMIENTO DE ARGININA
La arginina, en presencia de α-naftol, se oxida con hipobromito, perdiendo un grupo imino.
La arginina oxidada, al combinarse con otra molécula de α-naftol, forma una sustancia de color rojo que permite reconocerla.

RECONOCIMIENTO DE TRIPTÓFANO.
El triptófano en presencia de iones de magnesio y de ácido oxálico (reactivo de Hopkins-Cole) y conla presencia de un ácido mineral, como el ácido sulfúrico, produce coloraciones violetas en la interfase que se forma, debido a la formación de complejos con el grupo indol del triptófano.


DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS EN LAS PROTEÍNAS
La determinación de la presencia de aminoácidos sulfurados se realiza mediante una hidrólisis (puede ser incompleta) de la proteína...
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