Guia ESPECTRO DE ABSORCIÓN

UNIVERSIDAD DE CARABOBO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE BIOANÁLISIS – SEDE CARABOBO
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS
ASIGNATURA: ANÁLISIS INSTRUMENTAL

PRÁCTICA N° 3

INSTRUMENTACIÓN UTILIZADA EN LA
ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN VISIBLE.
ESPECTRO DE ABSORCIÓN.

INSTRUMENTACIÓN UTILIZADA EN LA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN VISIBLE

Introducción.

Gran parte de las mediciones que serealizan en el laboratorio clínico se logran a través de instrumentos que permiten conocer la concentración de una determinada solución.
En un principio para estas mediciones se utilizaron los llamados comparadores visuales, cuyo fundamento era comparar la intensidad de color de una muestra conocida con una de concentración desconocida, empleando como fuente de energía la luz solar.

ComparadoresVisuales
Espesor Constante
Espesor Variable
Comparador de Nessler
Comparador de Hellige
Comparador de Hehner
Comparador de Dubosq

Actualmente se usan los comparadores fotoeléctricos, los cuales miden la transmitancia o absorbancia de soluciones de concentraciones desconocidas comparándolas con soluciones de concentraciones conocidas.
La espectrofotometría de absorción consiste en la medida de laradiación que llega a un detector tras producirse un fenómeno de absorción de luz por parte de una sustancia absorbente.

Comparadores Fotoeléctricos
Fotocolorímetros
Espectrofotómetros
Un solo haz
Doble haz
Un solo haz
Doble haz

Estos instrumentos constan esencialmente de:
Fuente estable de energía radiante
Rendijas de entrada y salida
Sistema dispersante (monocromador)
Cubeta destinada a contenerla muestra
Detector de señal.
Sistema de registro (presentación de datos).

Las determinaciones espectrofotométricas han tenido un gran auge en los últimos años, sus principales ventajas son la elevada sensibilidad y especificidad que presentan con respecto a métodos usados anteriormente como los comparadores visuales, además tienen gran utilidad pues permiten realizar determinaciones rápidas.
Todoesto, unido a su adaptación en los autoanalizadores, la hacen una técnica imprescindible hoy por hoy en el Laboratorio Clínico.


FOTOCOLORÍMETRO KLETT SUMMERSON

Descripción.
Es un instrumento de base rectangular y de forma irregular, presenta en su base posterior un recubrimiento metálico que protege la lámpara, éste a su vez posee un switch que tiene por finalidad encender o apagar lalámpara.
En la parte media superior se encuentra un botón con el cual se ajusta el cero mecánico, “éste solo debe ser utilizado con el instrumento apagado”. Esto se debe al hecho de que el detector de este instrumento es una célula fotovoltaica, la cual sufre agotamiento cuando incide la radiación directamente sobre ella.
A un lado del pozo se observa un tornillo que tiene por objeto igualar la intensidadde luz que llega a ambos detectores.
Delante del recubrimiento metálico se observa un compartimiento donde se coloca el portafiltro. Luego un pozo donde se introducen las celdas para hacer mediciones.
A la derecha está otro switch que tiene la función de abrir o cerrar el circuito lateral, “cada vez que se va a retirar la celda debe cerrarlo”.
En la parte superior frontal, posee una ventana en laque se encuentra la aguja del galvanómetro, que mantiene una posición normal indicada por una línea centro vertical.
En su parte inferior central presenta un potenciómetro giratorio de color negro y bordes irregulares con doble función: 1) Llevar la escala a cero; y 2) Regresar la aguja del galvanómetro a su posición original, cuando es desplazada al hacer lecturas colorimétricas.

Constitución deacuerdo a su ordenamiento interno:
Lámpara
Lentes
Filtro
Pozo de muestra
Detectores
Galvanómetro

Ajuste:
1. Colocar el filtro requerido para la medición, conectar el instrumento a la fuente de poder.
2. Con el instrumento apagado, ajuste el cero mecánico del galvanómetro, colocando la aguja sobre la línea vertical, con el botón que se encuentra en la parte superior central del instrumento....