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Universidad de Concepción
Facultad de Ciencias Biológicas
Departamento de Microbiología

















GENETICA BACTERIANA
(CONJUGACION)
















Nombre: Oscar Benavides C.
Carrera: Biología
Asignatura: Microbiología
Profesor: Miguel Martínez P.
Ayudante: Paulina González M.
Karen Navarro J.
CarlaDaza
Sección: 1
Fecha: 24-Mayo-2013


Introducción

Las bacterias presentan una extraordinaria capacidad de adaptación a diferentes condiciones ambientales. Para entender esta capacidad de adaptación es fundamental conocer las bases genéticas de estos microorganismos, es decir, comprender como está organizada su información genética, como realizan y regulan su expresión y quemecanismos de variación génica poseen.
Para hacer genética, el genetista debe cruzar cepas de un organismo que tienen diferentes genotipos (y fenotipos) y buscar recombinantes. Los genéticos bacterianos que deseaban realizar estos cruces dependían de los procesos naturales por los que las bacterias intercambian material genético. Estos tres procesos son: transformación, que implica DNA donador enestado libre en el ambiente; transducción, en el que la transferencia del DNA donador esta mediada por un virus y conjugación, donde la transferencia implica un contacto célula–célula y la presencia de un plásmido conjugativo en la célula donadora (Madigan et al, 1999).
En el práctico, se evaluó el proceso de conjugación mediante una serie de experimentos, para ello se utilizaron dos cepas de E.coli, una receptora y otra dadora.

Metodología

Actividad 1: Caracterización de las cepas bacterianas dadora y receptora
a) Se sembró por diseminación en superficie cultivo liquido de E. coli K12 (cepa receptora) y E. coli FT17 (cepa dadora), en la mitad de una placa con agar Mac Conkey sin antibióticos.
b) Luego se adicionaron unas gotas de cada cultivo a tubos que contenían 2 ml deagua destilada. Se sembró con tórula una suspensión de la cepa dadora FT17 y de la cepa receptora K12 en placas con agar Muller Hilton, enseguida se depositaron en sus superficies discos impregnados con tetraciclina, kanamicina, ampicilina y acido nalidixico. Finalmente se incubaron ambas placas a 37°C por 24 horas.
Actividad 2: TSI
Se consideraron los dos cultivos líquidos anteriores: E.coli K12 y E. coli FT17 y se sembraron en tubos de TSI diferentes, para ello se inocularon por estría simple en la superficie y por picadura hasta el fondo del tubo. Finalmente se incubaron ambos tubos a 37°C durante 24 horas.
Actividad 3: Conjugación
Se sembraron 4,5 ml de cultivo de E. coli K12 y 0,5 ml de cultivo de E. coli FT17 en un matraz que contenía 10 ml de caldo tripticasa.Posteriormente se incubo este matraz durante 1 hora a 37°C. Transcurrido el tiempo, se diluyó la mezcla bacteriana en agua destilada estéril, llegando hasta la dilución 10-2. Enseguida se sembró 0.1 ml de la dilución 10-2 en la superficie de las placas que contenían:
1) Agar Mac Conkey con tetraciclina (25 µg/ml) y acido nalidixico (50 µg/ml).
2) Agar Mac Conkey con kanamicina (30 µg/ml) y acidonalidixico (50 µg/ml).
Se incubaron ambas placas a 37°C por 24 horas. Transcurrido ese tiempo se obtuvieron colonias aisladas en todas las placas, sin embargo, se consideró solo la placa con kanamicina y acido nalidixico, y de ella se seleccionó una colonia en particular. Dicha colonia seleccionada se diluyó en agua estéril y se procedió a sembrar en una nueva placa con agar Muller Hilton, enseguida sedepositaron en su superficie discos impregnados con tetraciclina, kanamicina, y acido nalidixico. Finalmente se incubó la placa a 37°C por 24 horas. Todas las experiencias se realizaron en ambiente de esterilidad.

Resultados

Actividad 1, b)

Antibiótico
Halo de
inhibición
Resistente (R) o Susceptible (S)
Ampicilina (10 mcg)
0
R
Ácido nalidíxico (30 mcg)
30 mm.
S...