Hidroxilamina como agente mutagénico para neurospora crassa

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HIDROXILAMINA COMO UN AGENTE MUTAGÉNICO PARA NEUROSPORA CRASSA

H.V. Malling
Divisón de Biología,Laboratorio Nacional Oak Ridge, Oak Ridge, Tennessi (E.U.A.)
(Recibido el 21 de Junio de 1966)

Resumen
La mutagenicidad de la hidroxilamina (HA) ha sido probada en 8 diferentes mutantes dependientes de adenina (ad-3B) de Neurospora crassa: 4 mutantes de éste conjunto de prueba después de sertratados con ácido nítrico y etil-metasulfonato indican que se puede revertir por una sustitución de una par de bases, 2 mutantes se revierten sólo después de ser tratados con ICR-170 lo que indica que se revierten por una inserción o por un corte de bases, y 2 mutantes se revierten solo espontáneamente.

HA indujo reversiones en 3 de los 4 mutantes los cuales revertieron por la sustitución deun par de bases y en ninguno de los otros. La especificidad de la acción del H.A. en los mutantes en el conjunto de prueba es consistente con la hipótesis que la clase predominante de las alteraciones genéticas inducidas por la HA en Neurospora es una par de bases de transición de guanina-citosina hacia adenina-timina. Más allá de eso, se encontró que la frecuencia de reversión después deltratamiento HA incrementó en proporción cuadrada del tiempo de tratamiento.

Introducción
HA induce las sustituciones en pares en los fagos y el tipo de alteraciones genéticas es preferentemente de GC a AT. La reacción química entre HA y ADN que ha sido analizada por Fresse y coolaboradores quienes encontraron que el HA reacciona sólo con la citosina y HMC.

El tratamiento de ARN con HA alteratanto uracil como citosina: a un pH de 6.1 la reacción es mucho más rápida con citosina que con uracilo, en un pH más alto la relación es revertida. HA ha sido usada para inducir daño cromosómico en células de mamífero, pero ningún intento previo de identificar la alteración producida por HA en eucariotes a nivel molecular ha sido exitoso. La caracterización de las mutaciones HA-inducidas enNeurospora es particularmente importante porque puede ser tan específica en eucariotes y también en fagos a la hora de producir mutaciones de un par de bases resultantes de cambios de GC a AT. Dicha especificidad puede hacer a HA especialmente adecuada para la caracterización de las alteraciones genéticas inducidas por mutágenos menos específicos a un nivel molecular por diversas pruebas derevertibilidad específica.

Pruebas para la inducción de reversiones en mutantes resultantes de alteraciones genéticas es un método mucho más simple para caracterizar los efectos genéticos de los mutágenos que alguna técnica avanzada de mutación en Neurospora. La caracterización es limitada por el arreglo de alteraciones genéticas en cada mutante comprendido en un grupo de prueba.

Como sea, alseleccionar los mutantes que revierten la mayoría de las alteraciones genéticas más comunes, es posible obtener una primera aproximación al espectro de las alteraciones genéticas producidas por un mutágeno dado.

En éste papel una prueba del grupo de mutantes de ad-3B que consiste en 4 mutantes que sólo son revertidos por la sustitución de un par de bases solamente, 2 mutantes que se revierten sólo por lainserción o eliminación de una base de pares, y 2 mutantes que se revierten espontáneamente cuando son tratados con HA y después son proyectados para detectar las reversiones a la cepa silvestre. El resultado de éstas pruebas nos indica claramente que Neurospora HA produce reversiones sólo en las cadenas que se revierten por la sustitución de un par de bases. La especificidad e la acción de HA enlos mutantes en el presente conjunto de prueba es consistente con la hipótesis que la clase predominante de alteraciones genéticas inducidas por HA en Neurospora es el par de bases de transición entre GC hacia AT.

Materiales y métodos

(a) Cadenas
Los mutantes con el prefijador 2-17 fueron inducidos por el ácido nítrico en Neurospora del tipo silvestre cadena 74A (De Serres, Brockman,...
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