Identificar bacterias gramnegativas

Para identificar bacterias gramnegativas, se debe de aplicar cierta nutrición microbiana y emplear un medio de cultivo que favorezca su crecimiento e inhibir el de otros microorganismos. Con estascaracterísticas se prepara el Agar MacConkey.

Preparación de agar MacConkey

Para preparar un Cultivo con agar MacConkey se hace lo siguiente:
Composición:
Polipeptona……………….3gPeptona………………….17g
Lactosa…………………..10g
Sales Biliares…………. 1.5g
Cloruro Sódico……………5g
Rojo Neutro…………...0.03g
Cristal violeta………..0.001g
Agar………………………15g
Agua destilada………1000ml

Disolver por calentamiento y agitaciónhasta ebullición, que deberá mantenerse durante 2 minutos. Ajustar el pH a 7,1 +/- 0,2. Esterilizar autoclave a 121°C durante 15 minutos. Atemperar a 47°C y preparar placas petri con proporciones de15-20 ml por placa.

Después de haber preparado los agares MacConkey, se procede a llevar dos cajas petri a la zona de cuidados especiales, y se realiza un muestreo por el método de sedimentación. Cadacaja petri se deja en un lugar distanciado una de la otra. Las cajas se dejan abiertas y asi se exponen al aire de la zona, durante 30 minutos. Después de ese tiempo las cajas se cierran para evitarque algún otro microorganismo entre en ellas. Las cajas se llevan a incubar a una temperatura de 37°C en un tiempo dado de 24 a 48 horas.

Al término de la incubación se observan las cajas de petri yse lleva a acabo la tinción Gram.
La tinción gran se lleva a cabo por los cuatro pasos siguientes:
1. El colorante cristal violeta tiñe todas las células en azul.
2. La solución de yodo (unmordiente) se agrega para formar el complejo cristal violeta-yodo; todas las células siguen teñidas de azul.
3. Un solvente orgánico, como acetona o etanol, extrae el complejo colorante azul delas bacterias gramnegativas con pared delgada, rica en lípidos a un grado mayor que las bacterias grampostivas de pared mas gruesa y escasa en lípidos. Los microorganismos gramnegativos...