Influencia de la concentración de enzima, sustrato y ph en la actividad enzimática de la a-amilasa.

ANTECEDENTES
Cinética enzimática
Las enzimas son moléculas de proteínas que tienen la capacidad de facilitar y acelerar las reacciones químicas que tienen lugar en los tejidos vivos, disminuyendo el nivel de la "energía de activación" propia de la reacción. Se entiende por "energía de activación" al valor de la energía que es necesario aplicar (en forma de calor, electricidad o radiación) paraque dos moléculas determinadas colisionen y se produzca una reacción química entre ellas.3

La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones químicas que son catalizadas por las enzimas. El estudio de la cinética y de la dinámica química de una enzima permite explicar los detalles de su mecanismo catalítico, su papel en el metabolismo, cómo es controlada su actividad en la célula ycómo puede ser inhibida su actividad por fármacos o venenos o potenciada por otro tipo de moléculas.2
La catálisis es el proceso por el cual se aumenta o disminuye la velocidad de una reacción química.2
Las enzimas no reaccionan químicamente con las sustancias sobre las que actúan (que se denominan sustrato), ni alteran el equilibrio de la reacción. Solamente aumentan la velocidad con que estasse producen, actuando como catalizadores. La velocidad de las reacciones enzimáticas dependen de la concentración de la enzima, de la concentración del sustrato (hasta un límite) y de la temperatura y el PH del medio.2
Enzimas digestivas
Las enzimas adoptan una estructura tridimensional que permite reconocer a los materiales específicos sobre los que pueden actuar -substratos-. Cada una de lastransformaciones, que experimentan los alimentos en nuestro sistema digestivo, está asociada a un tipo específico de enzima. Estas enzimas son las llamadas enzimas digestivas. Cada enzima actúa sobre un sólo tipo de alimento, como una llave encaja en una cerradura.4
En presencia de catalizadores específicos, que son las enzimas (E). Toda reacción enzimática puede esquematizarse como sigue:E + S E + P
Así, E se combina con un sustrato (S) que se transforma en un producto (P). El tiempo que tarda una determinada cantidad de sustrato en transformarse en producto es lo que caracteriza a la enzima, y se denomina velocidad o actividad enzimática (v) que se define como cantidad de sustrato transformado o de producto formado en la unidad de tiempo.2α-amilasa
La α-amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y cataliza la degradación del almidón, que es un polisacárido de reserva vegetal. El almidón está formado por dos tipos de moléculas: la amilosa y la amilopectina, ambos polisacáridos de glucosa. La amilosa se conforma por cadenas lineales de glucosas unidas por enlaces a- C1-C4, mientras que la amilopectina tiene,además de estos últimos enlaces, uniones C1 con C6, formando cadenas ramificadas. La a-amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la amilasa como en la amilopectina, dejando maltosa, glucosa y dextrinas lineales y ramificadas como productos.1

OBJETIVO
Comprobar la influencia de la concentración de enzima, sustrato y pH en la actividad enzimática de la a-amilasa.

METODOLOGÍA
Se preparó una solucióncolectando 1 mL de saliva (previo enjuague de la boca con agua destilada) y diluyéndolo hasta 20 mL con agua destilada.
Procedimiento # 1: estudio de la influencia de [E]
Se marcaron para su identificación 4 tubos de ensayo, posteriormente se le agregó a cada uno 2 mL de la solución de almidón al 0.5 %. Seguidamente se le añadió respectivamente a cada tubo 0.1, 0.2, 0.3 y 0.4 mL de la solución dela enzima, y se completó hasta un volumen de 0.5 mL con agua (añadiendo primeramente los volúmenes complementarios de agua y luego la solución de la enzima). Se adicionó la solución de la enzima a los tubos de manera rápida (agitando la mezcla del tubo) y se comenzó a medir el tiempo.
Para realizar el ensayo de la reacción se utilizó una placa de 24 pozos. Se preparó en uno de los pozos...