Informe P5

ACTIVIDAD ENZIMATICA. FACTORES QUE LA AFECTAN.
Informe. Practica 5
Carla Beatriz Rojas Zambrano. Cedula: 19339722
SECCION: 07
Semestre 2014-1. 2014
Departamento de Química
Laboratorio de Bioquímica
Universidad Nacional Experimental del Táchira
Introducción
Las células controlan el camino metabólico que opera, así como su velocidad, produciendo los catalizadores adecuados, denominados enzima, enlas cantidades adecuadas y en el momento que se necesitan. Casi todas las reacciones químicas de la vida son demasiado lentas sin catalizadores, y las enzimas son catalizadores mucho más específicos y poderosos que cualquier ion metálico o sustancia inorgánica. Las enzimas son moléculas proteicas grandes que el organismo forma por anabolismo con un coste energético considerable (Salisbury & Ross,2000).
En los seres vivos se han descubierto más de 5000 enzimas diferentes, y el número va aumentado según avanza las investigaciones. Cada enzima recibe un nombre según un sistema estandarizado y, además cada una de ellas tiene un nombre común. En ambos sistemas se acostumbra a utilizar el sufijo “-asa”, y el nombre caracteriza el sustrato sobre el cual actúa la enzima, así como el tipo dereacción que se cataliza (Salisbury & Ross, 2000).
Las enzimas aceleran las reacciones multiplicando su velocidad un millón de veces o incluso más. De hecho las mayorías de las reacciones en los sistemas biológicos no tienen lugar a velocidades perceptibles en ausencia de enzimas. Incluso una reacción tan sencilla como la hidratación de dióxido de carbono se cataliza por un enzima denominado anhidrasacarbónica. En su ausencia la transferencia de dióxido de carbono desde los tejidos a la sangre y desde esta hasta el aire alveolar seria incompleta (Stryer, 2007).
La mayor parte de la capacidad catalítica de los enzimas procede de yuxtaponer sus sustratos en orientaciones favorables dentro de los complejos enzima-sustrato para facilitar la formación de los estados de transición. Sabiendo que lasenzimas son selectivas en su unión a los sustratos y de ello depende gran parte de la especificidad de la unión. A una concentración constante de la enzima, la velocidad de la reacción aumenta con la concentración del sustrato hasta que alcanza su velocidad máxima (ver figura 1) (Stryer, 2007).La naturaleza proteica de estas enzimas les confiere especificidad, es decir, que cada enzima cataliza una determinada reacción, de allí que sean necesarias miles de ellas para que realicen diferentes reacciones bioquímicas en la célula viva. La actividad de las enzimas es afectada por factores tales como: concentración del sustrato, concentración de la enzima, pH, temperatura, activadores einhibidores. Cuándo se determina el efecto de un factor sobre la actividad enzimática, se deben mantener constantes los otros factores.

Metodología
El primer experimento realizado fue la preparación de la enzima, se colocaron 100ml de agua destilada fría en un balón aforado de 100ml rodeado de hielo. Se tomó una muestra de sangre fresca mediante punción con una aguja, colocando el dedo en la bocadel balón aforado, se agito vigorosamente, permitiendo que la sangre se mezclara de manera homogénea con el agua destilada obteniendo así la enzima lista para ser usada. Posteriormente, se realizó la obtención de la actividad enzimática mediante el efecto de la concentración del sustrato, se enumeraron y se prepararon 20 fiolas con las medidas y concentraciones que se indican en la tabla 1, paraobtener diferentes cantidades de permanganato de potasio gastadas según la actividad de la enzima en un periodo de tiempo de 0 a 5 minutos.
Cálculos y Resultados
Tabla 1. Datos registrados para cada experimento.
Fiola N°
H₂O₂ 2N (ml)
H₂O (ml)
H₂SO₄ 2N (ml)
Enzima (ml)
Tiempo (min)
H₂SO₄ 2N (ml)
KMnO₄ 0,01M gastado (ml)
1
5
8
10
4
0
-
1,7
2
5
8
-
4
1
10
1,3
3
5
8
-
4
3
10
1
4
5
8
-
4
5
10
0,8
5
3...