Ing. Biomedica

Facultad de Ciencias Naturales y Matemáticas
UNIDAD DE BIOLOGÍA
Biología Celular y Molecular
Ingeniería Biomédica

GUIA PRÁCTICA No. 8
Electroforesis
OBJETIVOS
 Comprender el fundamento dela técnica molecular de la electroforesis
 Realizar la electroforesis en agarosa de ADN amplificado por PCR
INTRODUCCIÓN
La electroforesis es la técnica mediante la cual una partícula cargada migrasobre un
soporte, bajo la influencia de un campo eléctrico. Dichos compuestos cargados se
separan en función de su carga y tamaño. La electroforesis en agarosa es el método
habitual para separar,identificar y purificar moléculas o fragmentos de ADN y ARN.
Para realizar este procedimiento se utilizan soluciones buffer (tampón) con pH básico
alrededor de 8, lo que garantiza que los ácidosnucleicos estén cargados
negativamente y que bajo un campo eléctrico migren hacia el polo positivo.
La electroforesis de ADN se puede llevar a cabo utilizando diferentes matrices de
soporte, pero lasmás usadas son agarosa y poliacrilamida. En ambos soportes los
diferentes fragmentos al tener la misma carga migran en función de su tamaño o
conformación al aplicar un campo eléctrico constante, loque significa que para
fragmentos de tamaño diferente la distancia recorrida por cada fragmento de DNA va
a ser inversamente proporcional al logaritmo de su peso molecular.
Los geles de agarosa seutilizan para separar fragmentos de DNA con diferencias de
tamaño de al menos 15 pb (por lo general de más de 50 pb), mientras que los geles de
poliacrilamida se usan cuando la diferencia entre losproductos es de menos de 15 pb.
La capacidad de separación de cada uno de los geles, además, será determinado por la
concentración a la cual se preparen, de manera que entre más concentrados, mayorserá la separación de los productos.
El uso de marcadores de tamaño conocido permite calcular los pesos moleculares de
las muestras de DNA.
En este laboratorio realizaremos la electroforesis...