Insulina

La insulina estimula la translocación de GLUT4 está mediada por una vía de señalización intracelular divergente

Resumen
* La insulina estimula el transporte de glucosa principalmente por la mediación de la translocación del transportador de glucosa que es sensible a la insulina; todo esto parte de un compartimento intracelular a la membrana plasmática.
* Por medio de la microinyeccióna la única célula de los adipocitos, 3T3-L1, y la detección por inmunofluorescencia de proteínas de GLUT4, se ha determinado que la inhibición de p21 endógeno ras o la inyección de oncogénica p21 ras no tiene ningún efecto sobre la estimulación de la translocación de GLUT4 que cumple la insulina.
* La microinyección de anticuerpos anti-fosfotirosina o la inhibición de fosfatidilinositol3-quinasa endógena por medio de la microinyección de un GST-p85, proteína de fusión SH2 marcadamente, inhibe el efecto biológico que cumple la insulina.
* En resumen de los dos puntos anteriores, se puede concluir que la p21ras, vía activada por mitógenos y la proteína quinasa no están involucradas en el efecto metabólico de la insulina, mientras que la fosforilación de la tirosina y laestimulación de la fosfatidilinositol 3-quinasa son componentes críticos de esta vía de señalización.

Introducción
* La insulina tiene efectos pleiotrópicos biológicos.
* Uno de los principales efectos fisiológicos de la insulina es la regulación de los niveles de glucosa en plasma, lo cual se logra por medio de la supresión de la producción hepática de glucosa y la estimulación de la captación deglucosa en los tejidos diana.
* La estimulación de la captación de glucosa en los tejidos diana se debe principalmente a la translocación de transportadores de glucosa sensibles a la insulina a partir de una reserva vesicular intracelular a la membrana plasmática, donde puede dar lugar la absorción de glucosa.
* La respuesta está mediada por una vía de señalización metabólica que esdivergente de la vía mitogénica, y puede al menos en parte, utilizar distintas moléculas de señalización.
* La precisión de esta vía de señalización dará información rica en implicaciones para una serie de enfermedades humanas: diabetes mellitus no dependiente de insulina, obesidad y síndrome del ovario poliquístico. Todas estas condiciones, están relacionadas con la resistencia a la insulina.* La función de disminución de la insulina estimula el transporte de glucosa.
* Las causas de la resistencia a la insulina en estados fisiopatológicos implican defectos en la vía metabólica de señalización de la insulina, causando un aumento en la captación de glucosa celular.

Procedimientos Experimentales

Materiales:
* Insulina porcina fue proporcionado amablemente por Lilly.* Policlonal anti-GLUT4 anticuerpo (F349)
* Monoclonal anti-GLUT4 anticuerpo (1F8) era de Oriente Acres Biológicos.
* Policlonal anti-c-fos anticuerpos fue de Oncogene Science.
* Monoclonal anti-p21ras anticuerpos (Y13-259) era de Santa Cruz de Biotecnología.
* Policlonal anti-SHC anticuerpo y el anticuerpo monoclonal anti-fosfotirosina (PY20) fueron de Transduction Laboratories.* Ras recombinante T24 y el N17 Ras (proteínas) fueron generosos regalos de JR Feramisco.
* GST-p85 SH2 (proteína de fusión) fue proporcionado amablemente por AR Saltiel.
* Las ovejas IgG e isotiocianato de fluoresceína, isotiocianato de tetrametilrodamina, y AMCA conjugado anti-conejo, rata, ratón, y ovejas anticuerpos IgG fueron de Jackson Inmunoresearch Laboratories Inc.
* Todoslos demás reactivos fueron adquiridos a Sigma.

Cultivo de Células y Microinyección:
* Las células HIRcB son los receptores de insulina de tipo humana silvestre, que se sobreexpresan por medio de los fibroblastos Rat1, los cuales son transfectadas de manera estable.
* Las células 3T3-L1 se cultivaron y se mantiene en Eagle modificado por Dulbecco, glucosa media alta, que contiene 50...