Investigacion

Tecnología del DNA Recombinante

Técnica

Cultek S.L.U.

TECNOLOGÍA DEL DNA RECOMBINANTE.
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Generalidades de la tecnología del DNA recombinante.
Fabricación del DNA recombinante.
: Enzimas de restricción.
: Vectores.
ª Plásmidos.
ª Bacteriófagos.
ª Cósmidos.
ª Cromosomas artificiales bacterianos.
: Transformación del DNA.
: Clonación de DNA enEscherichia coli.
: Clonación en huéspedes eucarióticos.
ª Vectores de levadura.
ª Cromosomas artificiales de levadura.
Construcción de bibliotecas de DNA.
: Bibliotecas genómicas.
ª Mutagénesis dirigida.
: Bibliotecas cromosómicas.
: Bibliotecas de cDNA.
Identificación de secuencias clonadas específicas.
: Sondas para rastrear clones específicos.
: Rastreo de una biblioteca.
: Paseocromosómico.
Métodos de análisis de secuencias clonadas.
: Mapas de restricción.
: Transferencia de Southern y Northern
: Secuenciación de DNA.
Transferencia de DNA a eucariotas.
: Células vegetales.
: Células de mamífero.
Aplicaciones de la tecnología del DNA recombinante.
: Aplicaciones en investigación y medicina
ª Modelos animales de enfermedades genéticas humanas: ratones knockout.
ª Terapiagénica.
: Aplicaciones industriales
: Aplicaciones en agricultura

09.2006

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Tecnología del DNA Recombinante

Técnica

Cultek S.L.U.

TECNOLOGÍA DEL DNA RECOMBINANTE.
Generalidades de la tecnología del DNA recombinante.
El término DNA recombinante hace referencia a la creación de nuevas combinaciones de segmentos o de moléculas de DNA que no seencuentran juntas de manera natural. Aunque el proceso genético de la recombinación produce DNA recombinante, este término se reserva a
las moléculas de DNA producidas por la unión de segmentos que provienen de diferentes fuentes biológicas.
La tecnología del DNA recombinante utiliza técnicas que provienen de la bioquímica de los ácidos nucleicos unidas a metodologías genéricas
desarrolladasoriginalmente para la investigación de bacterias y de virus. La utilización del DNA recombinante es una herramienta poderosa para
el aislamiento de poblaciones puras de secuencias específicas de DNA a partir de una población de secuencias mezcladas. Los procedimientos
básicos incluyen una serie de pasos:
1. Los fragmentos de DNA se generan utilizando unas enzimas denominadas endonucleasas derestricción, que reconocen y cortan las
moléculas de DNA por secuencias nucleotídicas específicas.
2. Los fragmentos producidos mediante la digestión con enzimas de restricción se unen a otras moléculas de DNA que sirven de vectores.
Los vectores pueden replicarse autónomamente en una célula huésped y facilitan la manipulación de la molécula de DNA recombinante
recién creada.
3. La molécula de DNArecombinante, formada por un vector que lleva un segmento de DNA insertado, se transfiere a una célula huésped.
Dentro de esta célula, la molécula de DNA recombinante se replica, produciendo docenas de copias idénticas conocidas como “clones”.
4. Al replicarse las células huésped, las células descendientes heredan el DNA recombinante, creándose una población de células idénticas,
que llevantodas la secuencia clonada.
5. Los segmentos de DNA clonados pueden recuperarse de las células huésped, purificarse y analizarse.
6. Potencialmente, el DNA clonado puede transcribirse, su mRNA puede traducirse, y el producto génico puede aislarse y examinarse.

Fabricación del DNA recombinante.

El desarrollo de las técnicas de DNA recombinante ofrece nuevas oportunidades para lainvestigación, ya que simplifica la obtención de grandes
cantidades de DNA que codifican genes específicos, y facilita las investigaciones de la organización, estructura y expresión génicas.
Esta metodología también ha dado un impulso al desarrollo de la naciente industria biotecnológica, que está suministrando un número creciente
de productos al mercado. El DNA recombinante produce grandes cantidades de...