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IDENTIFICACIÓN DE AZÚCARES

Método Cromatografía en Capa Fina

I.- INTRODUCCIÓN

Glucosa, fructosa, sacarosa y rafinosa, coexisten en la melaza de remolacha o betarraga. Algunos de ellos se encuentran presentes en grandes proporciones en la mayoría de los alimentos, bajo el rubro glúcidos. Estos azúcares pueden ser separados con fines analíticos, en poco tiempo, por cromatografía en capafina CCF (ó TLC). Para este efecto, se selecciona un sistema solvente-adsorbente apropiado para fines analíticos cualitativos. Los hidratos de carbono son compuestos polares que se separan rápidamente por cromatografía de partición debido a sus distintas constantes de distribución Kd, en donde el adsorbente, la capa porosa de gel de sílice actúa sólo como soporte para la fase estacionaria polarlíquida como el agua. La resolución puede llevarse a cabo por una fase móvil de carácter menos polar, consistente en una mezcla de solventes para eluir las muestras en la capa.

II.- OBJETIVO

Este trabajo práctico se centra en identificar la presencia de glucosa, fructosa, sacarosa y rafinosa por cromatografía en capa fina en muestras de alimentos comerciales: miel, betarraga, zanahoria, nectarde frutas, jugo en polvo y bebida cola. Se disponen los patrones de los azúcares para ser corridos junto con las muestras. Se pretende determinar de manera cuantitativa por la vía experimental los Rf (velocidades de migración) de los componentes en las muestras y compararlos con las referencias yuxtapuestas en la misma placa revelada. La información analítica, debe producirse a partir de los datosextraídos de la placa debidamente desarrollada y revelada, luego de un examen y medición acuciosos de ésta, junto a los cálculos correspondientes.

III.- MATERIALES

-Un equipo de Cromatografía de Capa Fina, compuesto por una cámara cromatográfica de vidrio macizo con tapa esmerilada, una placa cromatográfica k6f de sílica gel G60F, de 20 x 20 cm, con espesor de capa de 250 (m., paradesarrollo ascendente mediante fase líquida, consistente en una mezcla de solventes.
-Una estufa para el secado y posterior “quemado” de las placas con líquido revelador.
-Un gotario pequeño para dosificar las muestras y los patrones
-Vasos de precipitados de 50, 100 y 250 ml
-Matraces aforados de 50, 100, 250 y 500 ml
-Pipetas, propipetas, probetas y material de uso frecuente en laboratorio-Pulverizador de 500 ml para aplicar el revelador

IV.- REACTIVOS

-Metanol / -Etanol / -Éter etílico / -Metil-etil-cetona / -Ácido acético concentrado / -Acetato de etilo / -Agua destilada /-H2SO4 concentrado / -Glucosa / -Fructosa / -Sacarosa /-Rafinosa / -Ag NO3 / -NaOH / -NH4OH

V.- PARTE EXPERIMENTAL

1.- Preparar 350 ml de solución de desarrollo (eluente y fase móvil), seleccione una de las5 mezclas indicadas a continuación: . ¡¡ PRECAUCIÓN !!: LAS MEZCLAS SON TÖXICAS, INFLAMABLES Y *CORROSIVAS. Calcular las cantidades de los disolventes para las proporciones indicadas. Mezclar y agitar bien, mantenerla en un frasco tapado. Usar probetas para dosificar los solventes, trabajar en lugar ventilado y usar elementos de protección personal: lentes de seguridad, protector facial, yguantes de PVC.

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a. acetato de etilo : *ácido acético : metanol : agua = 12 : 3 : 3 : 2
b. isopropanol : *ácido acético : éter etílico = 4 : 3 : 3
c. isopropanol : acetato de etilo : agua = 60 : 30 : 10 ó 50 : 40 : 10
d. n-butanol : *ácido acético : agua = 50 : 25 : 25
e. metil-etil-cetona : *acido acético : metanol = 6 : 2 : 2

2.- Soluciones reveladoras (Preparanlos ayudantes) como sigue:

a) Solución alcohólica-sulfúrica (250 ml), H2SO4 al 2% en solución (etanol : agua) = 1:1 para ser usada por los grupos de trabajo 1 , 3 , 5 , 7 , 9.

En un vaso de precipitados de 400 ml agregar 120 ml de etanol puro a 120 ml de agua destilada, homogeneizar bien. Agregar enseguida a la mezcla, lenta y cuidadosamente con agitación constante, 5 ml de H2SO4...