Laboratorio de pruebas diagnósticas en medicina genómica

LABORATORIO DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR

Informe de laboratorio:
1. Describa brevemente en qué consiste la técnica del análisis de restricción con enzimas y explique cuál es su utilidad en el diagnóstico de enfermedades genéticas. Máximo 15 renglones.
Una enzima de restricción es una endonucleasa de origen bacteriano que tiene la propiedad de reconocer una secuencia específica de DNA, porejemplo GAATCC, unirse a ella y cortar el DNA en el sitio de unión y todas las subsecuencias CAATCC contenidas en un fragmento de DNA serán reconocidas y cortadas por la enzima de restricción correspondiente, generando diversos fragmentos de un tamaño discreto.
La capacidad de las enzimas de restricción de localizar una determinada secuencia específica para esa determinada enzima se hausado en genética con varios fines. Uno de ellos es examinar si dentro de una secuencia de DNA existe una determina subsecuencia, que puede ser una mutación o un polimorfismo. La técnica utilizada para ello consiste en incubar durante 2-4 horas, a una temperatura de 37 grados (u otra según la enzima) el DNA problema, con la enzima de restricción y un buffer. Si posteriormente corremos unaelectroforesis, encontraremos diversos fragmentos, según la enzima haya encontrado o no la secuencia de corte. Las variantes que aparecen al examinar una secuencia de DNA tras digerirla con una enzima de este tipo se denominan polimorfos de longitud de los fragmentos de restricción, RFLPs

2. Dé tres ejemplos de mutaciones puntuales que se encuentran en genes del genoma humano y que esténrelacionados con susceptibilidad o resistencia a alguna patología en humanos. Máximo 5 renglones para cada mutación. Debe incluirse la cita bibliográfica de la mutación que se describe, tal y como aparece en PUBMED.
* La mutación puntual en la línea germinal del receptor RET, que convierte la cisteína 634 en serina, es responsable de la neoplasia endocrina múltiple tipo 2 asociada a carcinomamedular de tiroides (MTC), en algunas tribus se ha encontrado que además del MTC se ven afectados por carcinomas papilares de tiroides (PTCs) lo
que sugiere que, en determinadas circunstancias, las mutaciones puntuales en RET pueden impulsar la generación de PTCs.1

1. The Oncogenic Activity of RET Point Mutants for Follicular Thyroid Cells May Account for the Occurrence of Papillary ThyroidCarcinoma in Patients Affected by Familial Medullary Thyroid Carcinoma. Rosa Marina Melillo, Anna Maria Cirafici, Valentina De Falco, Marie Bellantoni, Gennaro Chiappetta, Alfredo Fusco, Francesca Carlomagno, Antonella Picascia, Donatella Tramontano, Giovanni Tallini, and Massimo Santoro. Am J Pathol. 2004 August; 165(2): 511–521.
* La anemia falciforme afecta en el gen de la cadena B-globina dela hemoglobina en la posición 6. El triplete de nucleótidos CTC (o GAG en RNAm), que codifica el ácido glutámico se cambia por CAC (o GUG en RNAm), que codifica la valina en su forma homocigoto (HbsHbs). Los heterocigotos de células falciformes (HbAHbS) tienen menos infecciones graves por Plasmodium falciparum que los niños con hemoglobina adulta normal.2

* La mutación puntual específica enel gen de la protrombina [conversión de G en A en la posición 20210 (G20210A), se localiza en la región 3' no traducida del gen y da lugar a un incremento de 30% de las concentraciones plasmáticas de protrombina. Esta mutación es una de las causas genéticas más comunes de trombofilia, además la protombina G20210A predispone a padecer de trombosis venosa y embolia.3

Análisis de los resultadosen el gel de Agarosa

3. Interprete los resultados de cada carril de la electroforesis de ADN en el gel de agarosa (peso molecular, control, padre, madre, paciente y control (-)) (máximo 15 renglones).

2. Genetic control of resistance to human malaria. Allison AC. Curr Opin Immunol. 2009 May 11
3. Type and Location of Venous Thromboembolism in Carriers of Factor V Leiden or Prothrombin...