laboratorio de química organica

METODOS BIOQUIMICOS


OBJETIVOS:
 Analizar los mecanismos que llevan al
estudio detallado de organelos, supramoléculas y macromoléculas.
 Describir cada mecanismo

Catáfilo de cebollaCélulas de la mucosa bucal

Célula vegetal

Microorganismo

criofactura

Grabado por congelación

Métodos para determinar organelos,
macromoléculas y otros


A) Fraccionamientocelular: es la ruptura
controlada de la célula para obtener sus
diferentes componentes. Consta de 2 etapas:
 La homogeneización: se rompe la membrana
celular, tratando de dañar lo menos posible lamembrana de los organelos. Para ello se
utilizan medios químicos como detergentes;
mecánicos homogeneizadores o físicos
ultrasonido.
 Se realiza en un medio químico-salino que
preserva lamorfología y funcionalidad de los
organelos.

ultracentrifugación

FRACCIONAMIENTO


La separación de los componentes de la fase
anterior se obtiene utilizando criterios como el
tamaño y ladensidad de los organelos,
permitiéndonos distinguir 2 tipos de
fraccionamiento:
1. Centrifugación diferencial: separa los
organelos y demás componentes celulares
según su tamaño. El homogeneizadose
somete a la acción de campos gravitacionales
crecientes, provocando la sedimentación de
acuerdo al tamaño.

Centrifugación diferencial

Centrifugación diferencial

Centrifugaciónprimera parte

Segunda parte

Centrifugación isopícnica


Se basa en las diferencias de densidades de
los componentes del homogeneizado, es
decir, permite separar organelos distintos, pordiferencias de densidades. Para ello se
colocan en un tubo que contiene una solución
con diferentes grados de densidades. Luego
se centrifuga y por acción de fuerzas
gravitacionales y las diferenciasde densidad
los organelos avanzan hasta ubicarse en una
zona de la solución que tenga el mismo valor
de densidad. Obteniéndose organelos
purificados y separados.

Centrifugación isopícnica...