Laboratorio de tinción de microorganismos”

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Laboratorio de Nº2 de Microbiología:
“Tinción de Microorganismos”

NOTA: 6.0

Objetivos:

General

• Conocer e identificar los componentes de un microscopio óptico, así como emplear las diferentes técnicas de tinción de microorganismos.

Específicos

• Realizar tinción simple de mohos
• Realizar tinción gram de S.aureus, E. coli, frotis de boca y yogurtnatural.
• Realizar tinción estructural de
• Comparar resultados obtenidos con bibliografía.

Introducción

La experiencia se baso en conocer los distintos métodos de tinción, su aplicación y los diferentes usos, según lo que se pretende estudiar, así como también saber emplear el microscopio óptico. Por otra parte todos los microorganismos analizados fueron teñidos, para poderser visualizados.
Entre los métodos de tinción encontramos la tinción gram que diferencia las bacterias como gram positivas o gram negativas dependiendo de la composición de la pared celular que presenta cada bacteria, donde la muestra para estas tinción fue yogurt natural y epitelio interno de la boca; también se encuentra la tinción simple que se basa en el uso de colorantes básicos, ácidos oneutros, donde la afinidad del colorante con la bacteria se produce por diferencias de cargas entre ellos. El último método de tinción es la denominada tinción estructural, la cual se basa en adicionar sustancias que solo rodean a las células y su entorno, así finalmente lo que se observa es la forma exterior de la célula, es decir, por lo demás en ningún momento se tiñe la parte interior deella, ya que los colorantes que se ocupan no tienen afinidad por los constituyentes celulares, como lo es la tinta china, que se adicionó a Klebsiella neumoneae, y para asegurar que realmente se está observando el entorno de la célula, se adiciona safranina, que es una tinción de contraste. La muestra de yughurt, epitelio interno, y klebsiella neumoneae son fijadas en el portaobjeto, con el objetode detener cualquier proceso metabólico del microorganismo y esencialmente para adherir las muestras al portaobjeto. Todo lo anterior debe estar respaldado por una correcta manipulación y procedimiento según requiera cada método de tinción, ya que puede conducir a resultados y conclusiones erróneas. Luego en la manipulación del microscopio, se debió ajustar cada una de sus partes, es decir,fijación del objetivo adecuado para la muestra, intensidad de luz, y aceite de inmersión, cuando era requerido, el cual aumenta la resolución de la muestra, y permite ver una imagen más nítida.

3. Revisión bibliográfica

• Tinción Gram: tinción diferencial que se fundamenta en la morfología celular bacteriana.
Diferenciación de Gram(+) y Gram (-)
➢ La pared celular de lasbacterias Gram (+) posee una gruesa capa de peptidoglucano , además de dos clases de ácidos teicoicos: anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente en el peptidoglucano.

➢ Por el contrario, la capa de las Gram (-) tiene una capa delgada de peptidoglucanounida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido

Un microorganismo Gram (+) debe presentar una pared celular sana. El mimo microorganismo, si sufre daño de la pared por una u otra causa, se vuelve Gram (-). Esto indica la importancia de la pared para la retención o el escape del colorante.

La diferencia que seobserva en la resistencia a la decoloración, se debe a que la membrana externa de las Gram (-) es soluble en solventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea....
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