Laboratorio: determinación de niveles de colesterol total en sangre

LABORATORIO BIOQUIMICA
DETERMINACIÓN DE NIVELES DE COLESTEROL TOTAL EN SANGRE

OBJETIVO:
Aprender a realizar una buena determinación de los niveles de colesterol en sangre,apoyándonos en la teoría ya revisada previamente a la práctica y haciendo uso correcto del material necesario para esta.

FUNDAMENTO:
El colesterol se encuentra en el suero o enplasma en forma libre o esterificada con ácidos grasos, para la determinación del colesterol en sangre se utiliza un aserie de reacciones enzimáticas.
- En la primera reacción, losesteres se hidrolizan dejando libre al grupo 3 OH
-En la segunda reacción este grupo se oxida y se obtiene como un producto el peróxido de hidrógeno, el cual, por efecto de laperoxidasa, transfiere uno de sus oxígenos a un aceptor cromogénico, la absorbancia de este cromogénico se mide a 500 nm de longitud de onda
MATERIAL:
*
* 1 gradilla metálica* 3 tubos para espectofotómetro
* 1 micropipeta 10-100 ul
* 1 micropipeta 100-1000 ul
* Tubo vacutainer tapón rojo
* 1 aguja vacutainer
* Base holder
*Brazalete
* 5 torundas con alcohol
* 1 kit de reactivo para colesterol

PROCEDIMIENTO:
-Tomar muestra por sistema vacutainer
-Centrifugar 5 minutos a 2500 rpm
-Rotular los 3tubos
-Añadir soluciones:
1. Reactivo para colesterol 200 ul en cada tubo
2. Agua destilada –tubo 1: 20 ul
3. Patrón de colesterol: 200 mg/dl –tubo 2: 20 ul
4.Muestra – tubo 3 : 20 ul
-Incubar por 10 minutos a temperatura ambiente
-Leer en espectofotómetro a 500 nm de longitud de onda
-Leer en un período no mayor a 60 minutos
-Obtenerabsorbancia del patrón y muestra
-Realizar ecuación.

Am/Ap X 200 VALORES REFERENCIA: 200-400 mg/dl
(258/432)X 200= 119 mg/dl