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LABORATORIO 5
TRANSAMINASAS.

TRANSAMINASAS.
Las transaminasas (o aminotransferasas) son enzimastransferasas que catalizan la reacción de transferencia del grupo amino (-NH2) de un aminoácido a un α-cetoglutarato (un α-cetoácido).

FUNCIONES:
Estas enzimas son importantes en la producción de varios aminoácidos, y su medición en sangre se utiliza para diagnosticar y rastrear muchasenfermedades, y en especial para evidenciar la presencia de daño hepático.
Las transaminasas requieren la coenzima piridoxal-fosfato, que se convierte en piridoxamina en la primera fase de la reacción, cuando un aminoácido es convertido en un ácido ceto. La piridoxamina enlazada a la enzima reacciona con alanina, oxalacetato o alfa-cetoglutarato, dando piruvato, ácido aspártico o ácido glutámico,respectivamente.

Cuando el azúcar en sangre es bajo, el organismo debe romper las proteínas en aminoácidos, a expensas del tejido muscular. La preferencia de las transaminasas del hígado por el oxalacetato o el alfa-cetoglutarato desempeña un papel fundamental en la canalización del nitrógeno desde el metabolismo de los aminoácidos a asparagina y glutarato, para la conversión a urea que sirve comoexcreción del nitrógeno. Del mismo modo sucede en los músculos, donde el uso del piruvato en la transaminación produce alanina, que es llevada por la corriente sanguínea al hígado. Allí, otras transaminasas regeneran el piruvato, que proporciona un valioso precursor para la gluconeogénesis. Este ciclo de la alanina es análogo al ciclo de Cori, que permite el metabolismo anaerobio en los músculos.Las transaminasas mas importantes:
Las 2 transaminasas más importantes son:
La Transaminasa Glutamico-pirúvica (GPT) o AlaninaAminotransferasa (ALT).
La Transaminasa Glutámico-oxalacética (GOT) o AspartatoAminotransferasa (AST)
El aumento de estas enzimas en la sangre indica la existencia de una lesión celular en el hígado, el corazón, los riñones o en los músculos.

La GPT ó ALT
Laenzima ALT (GPT) se encuentra principalmente en el hígado y en los riñones y, en una pequeña cantidad, en los glóbulos rojos y en los músculos estriados.

La GOT ó AST
La enzima AST (GOT) se encuentra específicamente en los músculos estriados, en los glóbulos rojos y en el hígado.
Valores normales de la enzima GPT
En el hombre: de 8 a 35 UI/L (unidades internacionales/litro).
En la mujer: de 6 a25 UI/L.
Valores normales de la enzima GOT
En el hombre: de 8 a 30 UI/L.
En la mujer: de 6 a 25 UI/L.


DETERMINACION DE TRANSAMINASAS GOT Y GPT

Fundamento del Método

La GOT cataliza la siguiente reacción:
0 –aspartato + α -cetoglutarato GOT glutamato + oxalacetato


La GPT cataliza la siguiente reacción:
1 –alanina + α –cetoglutarato GPT glutamato + piruvato


ElPiruvato formado reacciona con la 2,4 –dinitrofenilhidracina produciéndose, en medio alcalino, un compuesto coloreado que se mide a 505nm.

Material

Jeringa
Alcohol
Algodón
Ligadura
Tubos de ensayo 13 x 100
Gradilla
Pipetas 1 y 5 ml.
Muestra: sangre(suero)


Equipos

Espectrofotómetro
Centrifuga


Reactivos

Set de transaminasas
Sustrato GOT
Sustrato GPT
2-4 DNFHHidróxido de sodio(diluyente para enzimas
Standard (solución de pirulato de sodio 2mmol/l).


PROCEDIMIENTO

En dos tubos de ensayo, colocar:


B
D
Sustrato GOT ó GPT
0.5 ml.
0.5 ml.

Colocar en baño María a 37 ºC unos minutos

Agregar:

Suero
----
100 ul.
Agua destilada
100 ul.
----

Mezclar por agitación suave e incubar 30 min.

Agregar.

RVO 2,4 DNFM
0.5 ml.
0.5 ml.Mezclar; Dejar 10 min. A 37ºC, agregar luego:

Hidróxido de sodio
5 ml.
5 ml.

Mezclar por inversión y retirar del baño

Después de 2 min. Leer la absorbancia en espectrofotómetro a 505 nm. llevando el aparato a cero con agua destilada.

Valores Normales: Hasta 12U/l.








CUESTIONARIO

1.- ¿Para que es útil la determinación de actividad enzimática, actividad...