Levaduras

A. Digestión de polisacáridos (almidón).
1. En una placa con gelosa almidón, sembrar por estría abierta la cepa seleccionada.
2. Incubar a 37 °C durante 24 horas.
3. Añadir unas gotas de solución de lugol alrededor del crecimiento y en una zona en donde no haya inoculado al microorganismo.
4. El almidón intacto toma una coloración azul violácea con el lugol.
Digestión de almidónpositiva: aparición de un halo claro alrededor de la estría.
Digestión de almidón negativa: no se observa halo alrededor de la estría.
B. Fermentación de azúcares en medio de Kligler.
1. Inocular por picadura y en la superficie del tubo que contienen medio de Kliegler, la cepa seleccionada.
2. Incubar a 37 °C durante 24 horas.
3. Observar el resultado e interpretarlo como sigue:Fermentación de glucosa = vire del rojo de fenol (indicador de pH) de rojo a amarillo en el fondo del tubo.
Fermentación de lactosa = vire del indicador de rojo a amarillo en la superficie del medio de cultivo.
Producción de H2S = presencia de un precipitado negro en el medio de cultivo.
C. Fermentación de azúcares. Prueba del rojo de metilo.
1. Inocular la cepa seleccionada en el tubo con caldorojo de metilo (RM).
2. Incubar a 37 °C durante 24 horas.
3. Añadir al tubo 5 gotas de solución de rojo de metilo (indicador de pH).
4. Observar el resultado e interpretarlo como sigue:
Prueba de rojo de metilo positiva = presencia de color rojo en todo el cultivo o cuando el reactivo permanece de ese color en la superficie del medio.
D. Fermentación de azúcares. Prueba de VogesProskauer.
1. Inocular la cepa seleccionada en el tubo que contienen caldo VP.
2. Incubar a 37 °C durante 24 horas.
3. Agregar los siguientes reactivos en el orden que se indica:
6 gotas de una solución de alfa naftol.
2 gotas de una solución de KOH creatina.
4. Agitar el tubo suavemente y dejarlo en reposo a 37 °C durante un tiempo de 20 a 30 minutos.
5. Observar el resultado einterpretarlo como sigue:
Prueba de VP positiva (producción de acetil metilcarbinol) = presencia de color rojo en la superficie del medio de cultivo.
E. Prueba de la catalasa.
Método del portaobjetos.
1. Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24 horas y colocar sobre un portaobjetos limpio.
2. Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H2O2 al 30% sobre elmicroorganismo sin mezclarlo con el cultivo.
3. Observar la formación inmediata de burbujas (resultado positivo).
4. Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante.
F. Prueba selectiva rápida para ureasa.
Se realiza según el siguiente procedimiento:
1. Pasar un hisopo de algodón impregnado de substrato con urea deshidratado sobre la superficie de dos o tres colonias, de modo quela punta se cubra con el microorganismo.
2. Colocar el hisopo con la levadura dentro de un tubo que contenga 3 gotas de cloruro de benzalconio al 1% (pH 4,86 ±0,01) y rotar con firmeza contra el fondo para poner en contacto los microorganismos con las fibras de algodón.
3. Tapar el tubo e incubar a 45 °C durante 30 minutos.
4. Examinar a los 10, 15, 20 y 30 minutos para detectar un cambio decolor de amarillo a púrpura. Un color rojo a púrpura indica producción de ureasa.







Tinción Simple:
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