Lowry

LOWRY
Time comparison of BCA Protein Assay Reagent vs. Lowry Protein Assay.
BCA Protein Assay Reagent
1. Mix reagents 1 minute
2. Add sample and incubate 30 minutes
3. Read at 562nm 1 minuteTotal BCA Time: 32 minutes

Lowry Protein Assay
1. Make reagents 70 minutes
2. Add sample and incubate 20 minutes
3. Add Folin Reagent 1 minute
4. Incubate 30 minutes
5. Read at 750nm 1 minuteTotal Lowry Time: 122 minutes

Método de Lowry:
COMBINA LA REACCIÓN DE BIURET CON LA REDUCCIÓN DEL REACTIVO DE
FENOL FOLIN-CIOCALTEAU (ÁCIDO FOSFOMOLÍBDICO-FOSFOTÚNGSTICO)
POR LOS RESIDUOS DETIROSINA Y TRIPTOFANO DE LAS PROTEÍNAS. EL
COLOR AZULOSO DESARROLLADO ES LEÍDO A 750nm (ALTA SENSIBILIDAD
PARA UNA CONCENTRACIÓN PROTÉICA BAJA) O A 500nm (ALTA SENSIBILIDAD
PARA UNA CONCENTRACIÓNPROTÉICA ALTA) La elección de una u otra

depende de la concentración proteica de la muestra estudiada. Presenta dos
máximos.
Pero cuando tratamos con mezclas biológicas complejas, podemosperfectamente calibrar el método con alguna proteína comercial, como es la
seroalbumina bovina.
La reacción que tiene lugar en el metodote Lowry es bastante compleja y
no del todo conocida. Se desarrolla enlas siguientes fases:
1.-Reacción previa de la proteína en medio alcalino con iones Cu2+, en
presencia de tartrato para evitar la precipitación. Es esencialmente idéntica
a la reacción del Biuret,formándose un complejo de coordinación entre el
cobre y el nitrógeno peptídico.
2.-Reacción con el reactivo de Folin-Ciocalteau para fenoles (ácido
fosfomolibdotungstico), que se reduce por medio delos grupos fenol (y en
menor medida imidazol e indol) presentes en la proteína a un complejo de
color azul oscuro, que se mide colorimétricamente.
(1951) es un método colorimétrico de valoracióncuantitativa de las proteínas.
Bajo condiciones alcalinas el Cu++ forma un complejo con los enlaces peptídicos de
las proteínas y se reduce a Cu+. El Cu+ así como los grupos R de Tirosina,...