Método De Determinación De Proteína Total

¨Método de determinación de proteína total ¨

Experiencia #3

Química 361

Profesor Asistente: Alexander Arosemena
Profesor de la Catedra: Dr. Enrique Murillo

Pineda, Arianne
8-808-9

Fecha deentrega: martes 1 de mayo de 2012

Método de Biuret
Utilizamos una solución patrón de suero albúmina bovina de 5mg/mL. Para realizar esta prueba, mezclamos la solución patrón con la solución de Biuret yapreparada, incubamos durante 10 minutos a 37°C. Dejamos enfriar y leímos la absorbancia en 540nm.
tubo | BSA (mL) | Muestra (mL) | Reactivo de Biuret (mL) | H2O (mL) | Mg BSA | A 560 nm |
B | 0.00 |0.00 | 3.00 | 2.00 | 0.00 | 0 |
1 | 0.40 | 0.00 | 3.00 | 1.60 | 2.00 | 0.0915 |
2 | 0.80 | 0.00 | 3.00 | 1.20 | 4.00 | 0.2218 |
3 | 1.20 | 0.00 | 3.00 | 0.80 | 6.00 | 0.2924 |
4 | 1.60 | 0.00 |3.00 | 0.40 | 8.00 | 0.4089 |
5 | 2.00 | 0.00 | 3.00 | 0.00 | 10.00 | 0.5229 |
M1 | 0.00 | 0.20 | 3.00 | 1.70 | --- | 0.0604 |
M2 | 0.00 | 0.60 | 3.00 | 1.60 | --- | 0.2146 |

Obtuvimos la ecuaciónde la recta:
Y=0.0515 x
Con la cual determinamos los valores de los mg de BSA correspondientes a la absorbancia de M1 y M2:
Para M1: tenemos A=0.0604
Y = 0.0515 x
0.0604= 0.0515x
X= 1.17 mg BSA
ParaM2: tenemos A = 0.2146
Y=0.0515x
0.2146=0.0515x
X= 3.8 mg BSA

En 0.20 mL de BSA habrá:
Mg proteína 1.17 mg xx1.80 mL BSA0.2 mL muestra =3.40 mg=0.03g
En 0.60 mL de BSA habrá:
3.8 mg x1.00 mL BSA0.60mL muestra=6.33 mg=0.06g

Ensayo de Lowry
Se tomaron 8 tubos de ensayo y se adicionaron alícuotas de las muestras y patrones según lo que indica el siguiente cuadro. Luego del último reactivo, se dejoreposar 30 minutos y se le leyó la absorbancia a 660 nm.

mg de Proteína | mL de SDS al 1% | mL de la muestra | mL del patrón de BSA | mL de solución alcalina | | mL del reactivo de Folin | | %T |A660nm |
B | 0 | 0,50 | - | - | 5,00 | Espera | 0,50 | Espera de | 100 | 0,000 |
M1 | x | 0,25 | 0,25 | - | 5,00 | de | 0,50 | 30 min | 85 | 0.0705 |
M2 | x | 025 | 0,25 | - | 5,00 | 10 | 0,50 |...