MÉTODO Punto Isoelectrico

MÉTODOS:
DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO
Colocar soluciones de pH que varíen desde 3.6 hasta 5-6.
Llenar los tubos con precisión por medio de pipetas graduadas (ver cuadro 1).

CUADRO1
Mezcla de soluciones de acetato de sodio y ácido acético a pH requerido

pH requerido
Solución 0.1 M CH3COONa (ml)
Solución 0.1 M CH3COOH (ml)
4.0
0.90
4.10
4.2
1.30
3.70
4.4
1.95
3.05
4.62.45
2.55
4.8
3.00
2.00
5.0
3.50
1.50

PROCEDIMIENTO:

1 PASO: En un vaso de precipitación agregar 10 % de leche descremada en polvo y el 90% de agua.



Agua: 90 gLeche descremada en polvo: 10 g

2 PASO: Llenar cada tubo de ensayo con la solución que nos muestra en el cuadro 1








3 PASO: Agitar bien cada tubo de ensayo y agregar durante laagitación 0.5 mL de la preparación que se hizo en el paso 1.



4 PASO: Observar la aparición de sedimentos en los diferentes tubos, anotar los pH según el orden de aparición del sedimento.



5 PASO:Determinar el pH del punto isoeléctrico






DESNATURALIZACIÓN DE PROTEÍNAS

CUADRO 2
Reactivos y tratamiento térmico para desnaturalización de proteínas

N° de tubo
Reactivo
Tratamientotérmico
1
5ml de acetato de sodio
100°C x5 min.
2
5ml de ácido acético
100°C x5 min.
3
5ml de agua destilada
100°C x5 min.
4
5ml de agua destilada
Blanco

PROCEDIMIENTO:

1 PASO: En un vaso deprecipitación agregar 15 % de clara de huevo.










2 PASO: En cuatro tubos de ensayo incorporar 5 ml de clara de huevo al 15% y adicionar a cada tubo diferente, 5ml de los reactivos segúnla secuencia que se presenta en el cuadro 2.



3 PASO: Llevar los tres primeros tubos a ebullición por 5 minutos.



4 PASO: Enfriar y realizar la prueba de Biuret a todos los tubos.



5PASO: Adicionar 5 ml de hidróxido de sodio (2M) y a.5 ml de solución de sulfato de cobre al 0.5%.


6 PASO: Compare en forma visual la intensidad de color, discuta y concluya.