Métodos de estudio del comportamiento reproductivo del los híbridos interespecíficos

Métodos de estudio del comportamiento reproductivo del los híbridos interespecíficos

Evaluación de la penetración polínica.
Los estudios de compatibilidad entre especies se realizan mediante la evaluación de la interacción polen-pistilo (Rêgo et al. 2000, Ganesh et al. 2007). Esto se realiza mediante la observación directa de la germinación de los granos de polen en el estigma, y delcrecimiento del tubo polínico a través del estilo y su llegada al óvulo. En caso contrario, se determina el sitio donde se produce la detención y/o crecimiento anómalo del tubo polínico, lo que aporta elementos acerca del tipo de incompatibilidad.
Esta evaluación se realiza generalmente con la metodología de Martin (1959), que se basa en la especificidad del colorante azul de anilina, para teñir lacalosa presente en la pared del tubo polínico. Este puede ser observado bajo luz UV (350-400 nm), en microscopia de epifluorescencia.
En café, Lashermes et al. (1996), evaluaron la herencia de la autoincompatibilidad en plantas doble haploides e híbridos C. canephora, para lo cual describió el nivel de penetración del tubo polínico en el pistilo (24 h después de la polinización), la fructificaciónpor genotipo y realizó análisis de ligamiento con marcadores RFLP y RAPD. La autoincompatibilidad no fue afectada por el bajo vigor de los doble haploides, confirmando la autoincompatibilida gamética, controlada por un locus simple. Este último fue asociado a marcadores RFLP.

Análisis meiótico
Se realiza por observación directa de las distintas fases meióticas, para lo cual se elaboranmontajes en los que los cromosomas son teñidos con colorantes como Gimsa, orceína acética o acetocarmin, para interpretación en microscopía óptica, o con DAPI para microscopía fluorescente.
La evaluación meiótica implica la identificación de apareamientos cromosómicos (frecuencia de quiasmas), que depende de la afinidad genómica entre las especies cruzadas, lo cual permite inferir el grado de relacióngenómica entre ellas, que ocurre solo si sus cromosomas tienen algún nivel de homología genética y estructural. La presencia de anormalidades en las fases de la meiosis, determina la estabilidad del proceso y por ende la viabilidad del producto meiótico.
En este tipo de evaluaciones la hibridación interespecífica se ha utilizado con el propósito de estudiar los procesos básicos de la meiosis, lasanormalidades y sus consecuencias. Un ejemplo de esto en el estudio de Vafaie y Chandrashekaran (2007), sobre la formación del huso bipolar secundario en metafase II de híbridos del genero Gossypium.
Los análisis meióticos son utilizados frecuentemente para investigar las relaciones taxonómicas y genéticas de un genero o de un grupo de especies, utilizado por Tong y Bosland (2003) en Capsicum,por Espinoza y Quarin (1998) en Paspalum, Krug y Mendes (1941) y Reddy y Narayan (1981) en Coffea.
Por otro lado, trabajos como los de Zhao et al. (2007) en el género Agrotis, entre otros, han contribuido a precisar los riesgos sobre la transferencia involuntaria de "transgenes" a las especies silvestres relacionadas.

Índice de afinidad.
Menzel y Martin (1970), usaron para comparar el gradode homología entre genomas de especies del genero Glycine, el índice de afinidad genética (IAG), el cual se estima mediante la frecuencia media de bivalentes del híbrido (y multivalentes) dividido por el número cromosómico básico, por lo cual sus valores varían entre 0 y 1. Genomas con IAG superior a 0,9 se consideran similares. En los casos en el que el número básico aun esté en debate, se puedeutilizar el número de cromosomas gaméticos (Singh 2003).
Singh y Hymowitz (1985) lo utilizaron al estudiar las relaciones genómicas entre especies del genero Glycine, lo cual Permitió asignar símbolos genómicos de seis especies, de acuerdo a su posible origen. Bothmer et al. (1986), calcularon el IAG de especies de Hordeum del norte y sur de América, en un rango de 0.52-0.82, lo cual les...