Mamiferos

1.1 TECNICA GENERAL PARA SANGRE COMPLETA
A un frasco de 50 ml para cultivo celular se agrega: 1 ml de sangre9 ml de medio de cultivo completo, se colocan en la incubadora a 37 grados centígrados yse incuban por 67 horas. Posteriormente, se separan los leucocitos por centrifugación. Se centrifuga la sangre a 1.200 r.p.m durante 20 minutos, Se retira la capa espesa junto con el plasma. Se leagrega la solución hipotónica durante 30 minutos, Se prefija con solución carnoySe centrifuga durante 10 minutos a 1200 r.p.mSe extrae el sobrenadanteSe hacen 4 lavados con carnoy y se resuspende en 0.5ml de carnoySe gotean las láminas, se flamean, se secan y se observan al microscopio.
 
CAPITULO 1METODOS DE CULTIVO CELULAR
Existen principalmente dos: Cultivos a corto término y cultivos a largotérmino
 1 CULTIVOS A CORTO TERMINO
La fuente de células en división mas frecuentemente empleadas para el análisis citogenético, son los leucocitos mononucleares de la sangre periférica. .La sangrese recoge en tubos estériles con 10 - 20 UI de heparina sódica en solución acuosa. Se pone la sangre completa en un medio de cultivo, completado con suero y antibióticos. Se añade un mitógeno como lafitohemaglutinina, para estimular la división celular y se incuban a 37 grados durante 66 a 72 horas ( estos valores dependen de la temperatura de la especie a investigar o analizar y del ciclocelular de las células a indagar en cada especie ).Seguidamente se le añade colchicina y se incuban durante 1 hora mas antes de comenzar a recolectar las células.La colchicina evita la formación del husocelular y detiene la división celular en lametafase que es en donde mejor se observan los cromosomas para el estudio, también provoca la contracción y separación de los cromosomas.Posteriormente lascélulas se suspenden en una solución hipotónica que hincha lascélulas y dispersa los cromosomas, después de esto las células se fija en metanol -acético, conocido como solución de carnoy, se gotean...