MANUAL DE PRACTICAS MICROBIOLOGÍA_1_1

Práctica 1
Métodos de Esterilización y Controles
Objetivo
Que el alumno prepare material de uso común en un
laboratorio de microbiología para su esterilización y
analice los diferentes métodos para seleccionar el más
adecuado acorde a la naturaleza del material, haciendo uso
de controles de esterilización.

Introducción
La esterilización es el proceso mediante el cual se elimina
toda la materiaviva (incluyendo virus, esporas y priones) de
un objeto o sustancia. Existen varios métodos de esterilización los cuales se clasifican comúnmente en físicos y
químicos, para seleccionar el más adecuado es necesario
conocer la naturaleza del material, el costo del proceso, la
naturaleza de los microorganismos a eliminar, la accesibilidad tecnológica y el impacto ambiental.

1.Métodos Físicos
a)Calor húmedo
La aplicación de calor es uno de los métodos más utilizados para esterilizar materiales en el laboratorio, Una temperatura de 100 °C matará
a la gran mayoría las formas vegetativas de microorganismos, pero no a muchas esporas, para matar a estas es necesario una temperatura de
121 °C durante 15 minutos a 15 libras de presión. Generalmente se utiliza vapor a alta presión, debido a que lasbacterias se mueren más
rápidamente cuando se encuentran húmedas asimismo el vapor proporciona un medio de distribuir el calor uniformemente en todas las
partes del recipiente, lo cual proporciona una mayor penetración en el material a esterilizar, el vapor tiene un coeficiente de transferencia de
calor mayor que el aire.
El calor actúa desnaturalizando y coagulando las proteínas y los ácidosnucléicos de la célula y fragmentando las membranas celulares.

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Práctica 1 1 Métodos de Esterilización y Controles

b ) Calor seco :
Se utiliza para esterilizar materiales que deben permanecer secos para lo cual se dispone de hornos eléctricos por los que circula
aire caliente, se aplica una temperatura de 160 –170 °C durante una hora. Ladestrucción de los microorganismos ocurre por
desecación de la célula, procesos oxidativos de los componentes celulares, una coagulación lenta de las proteínas y fusión de
membranas.

c ) Incineración :
El fuego es un agente esterilizador eficaz y el más simple de todos. Es frecuentemente utilizada, para esterilizar el asa
bacteriológica para sembrar o resembrar un cultivo. Al flamear el asa, debeevitarse, que esta asa lleve grandes cantidades de
material biológico, pues podría diseminarse partículas infectantes (Fig 1). A veces para materiales como tijeras, hojas de bisturí o
pinzas, se puede esterilizar introduciéndolos en alcohol y encendiéndolo. Se debe repetir tres veces para lograr una esterilización
completa. El método es rápido pero produce carbonización y pérdida del filo.

e)Filtración a través de Membranas
Algunas sustancias no pueden ser esterilizadas por calor húmedo o seco
pues son termolábiles (Fig 3), es decir que se desnaturalizan o que
pierden alguna propiedad deseable, en tal caso se utilizan sistemas de
filtración de membranas para retener a los microorganismos. Aquí
debemos de conocer las dimensiones del microorganismo a eliminar
para poder utilizar el filtro deporosidad adecuado.
Los filtros utilizados son fabricados con porcelana, cuarzo, tierra de
diatomeas, vidrio pulverizado, asbesto o ésteres de celulosa, en el caso
de los filtros de la marca Millipore se utiliza como bioindicador a Pseudomonas diminuta para filtros con un diámetro de poro de 0,22 µm, aunque
también se utilizan los de 0,45 µm para esterilizar antibióticos y esteroides.
Fig 3.

2.Métodos Químicos
a) Gases (oxido de etileno) y líquidos (formaldehído y β propiolactona)

Fig 1. El fuego como agente esterilizador.

Fig 2. Equipo de esterilización

d) Radiaciones ionizantes y no ionizantes:
La radiación ultravioleta provoca daño en el ADN, la luz ultravioleta induce el entrecruzamiento de bases de timina adyacentes
en una u otra de las dos cadenas de polinucleótidos, formando...