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Páginas: 3 (632 palabras)
Publicado: 5 de enero de 2011
DETERMINACIÓN COLORIMÉTRICA DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BIURET
El método de Biuret permite determinar la concentración de proteínas de una muestra. Se basa en la reacción que tiene lugar entre losiones de cobre del reactivo de Biuret y los nitrógenos de los enlaces peptídicos de las proteínas. Se produce un complejo de color azul que absorbe entre 540 y 550 nm. La intensidad del color es unamedida directa de la concentración del complejo. El rango de concentraciones que se pueden medir mediante este ensayo está comprendido entre 0,5 y 10 mg de proteína/ml
REACTIVOS
A) PREPARACIÓN DELREACTIVO DE BIURET
1.- Disolución A: Disuelvo 1,5 g de CuSO4.5H2O y 6 g de tartrato sódico-potásico en 500 ml de agua destilada. 2.- Disolución B: Preparo 300 ml de NaOH al 10% (p/v) 3.- Junto lasdisoluciones A y B y llevo el volumen a 1 litro.
B) DISOLUCIÓN ESTÁNDAR DE PROTEÍNA
La disolución estándar de proteína es una disolución de BSA (seroalbúmina bovina) en agua con una concentraciónde 10 mg/ml. Esta disolución de concentración conocida me permitirá construir la recta patrón.
C) DISOLUCIÓN PROBLEMA DE PROTEÍNA
La disolución cuya concentración de proteína se quiere determinarse trata de una muestra de ovoalbúmina (clara de huevo).
LA RECTA PATRÓN
La recta patrón se construye a partir de las absorbancias medidas en una serie de tubos que contienen una cantidad conocidade proteína. Para ello, hay que preparar una serie de tubos (numerados y por duplicado) que contengan las siguientes cantidades de proteína: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, y 7 mg prot/ml. Además, se incluirá unpar de tubos a los que contienen una cantidad desconocida de proteína. La muestra problema se ha obtenido a
partir de clara de huevo. A continuación se añade a cada tubo 4 ml del reactivo deBiuret. Se deja que transcurra la reacción durante 20 minutos y a continuación se determina la absorbancia a 546 nm (A546) de cada tubo. El procedimiento se resume en la siguiente tabla: Nº de tubo ml...
El método de Biuret permite determinar la concentración de proteínas de una muestra. Se basa en la reacción que tiene lugar entre losiones de cobre del reactivo de Biuret y los nitrógenos de los enlaces peptídicos de las proteínas. Se produce un complejo de color azul que absorbe entre 540 y 550 nm. La intensidad del color es unamedida directa de la concentración del complejo. El rango de concentraciones que se pueden medir mediante este ensayo está comprendido entre 0,5 y 10 mg de proteína/ml
REACTIVOS
A) PREPARACIÓN DELREACTIVO DE BIURET
1.- Disolución A: Disuelvo 1,5 g de CuSO4.5H2O y 6 g de tartrato sódico-potásico en 500 ml de agua destilada. 2.- Disolución B: Preparo 300 ml de NaOH al 10% (p/v) 3.- Junto lasdisoluciones A y B y llevo el volumen a 1 litro.
B) DISOLUCIÓN ESTÁNDAR DE PROTEÍNA
La disolución estándar de proteína es una disolución de BSA (seroalbúmina bovina) en agua con una concentraciónde 10 mg/ml. Esta disolución de concentración conocida me permitirá construir la recta patrón.
C) DISOLUCIÓN PROBLEMA DE PROTEÍNA
La disolución cuya concentración de proteína se quiere determinarse trata de una muestra de ovoalbúmina (clara de huevo).
LA RECTA PATRÓN
La recta patrón se construye a partir de las absorbancias medidas en una serie de tubos que contienen una cantidad conocidade proteína. Para ello, hay que preparar una serie de tubos (numerados y por duplicado) que contengan las siguientes cantidades de proteína: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, y 7 mg prot/ml. Además, se incluirá unpar de tubos a los que contienen una cantidad desconocida de proteína. La muestra problema se ha obtenido a
partir de clara de huevo. A continuación se añade a cada tubo 4 ml del reactivo deBiuret. Se deja que transcurra la reacción durante 20 minutos y a continuación se determina la absorbancia a 546 nm (A546) de cada tubo. El procedimiento se resume en la siguiente tabla: Nº de tubo ml...
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