Medicion de biomas

MÉTODOS DE CUANTIFICACIÓN DE BIOMASA

Objetivos:
* Cuantificar la cantidad de biomasa que se tiene en un cultivo determinado.
* Identificar y aplicar los métodos de cuantificación de biomasa, tanto los directos como los indirectos.
* Realizar la cuantificación de biomasa partiendo de una solución madre, haciendo uso de los métodos de peso seco, conteo de células en cámara deNeubauer y por lectura de absorbancia.

Marco Teórico
Bajo un punto de vista productivo es necesario poder cuantificar los microorganismos. Debido a las diferencias morfológicas de las células, de las formas de crecimiento y de las características de los medios de cultivo no existe una forma única de cuantificar la biomasa. El medio de cultivo es un factor importante a considerar.
Métodos decuantificación
Directos
* Recuento de microorganismos
* Determinación de masa de microorganismos
Indirectos
Determinación de elementos que tengan una relación con la cantidad de biomasa
Métodos Directos de cuantificación
Recuento en microscopio
Se realiza en celdas de conteo, las cuales tienen un volumen definido. Es útil solo cuando las células crecen en forma individual.Se puederealizar tinción para determinar las células viables y no viables. Si las células presentan gran movilidad, esto puede interferir en la cuantificación
Recuento en Placa
Se basa en el principio que una célula da origen a una colonia. Las células deben crecer en forma individual, no en racimos. La placa debe ser incubada entre 24 y 72 horas. Las células quedan separadas y distribuidas en lasuperficie de la placa. En una placa estándar (10 cm diámetro) sobre 300 colonias se puede incurrir en errores al contar
Contador Coulter
El principio del contador celular se basa en la medida de los cambios en la resistencia eléctrica que se producen cuando una partícula no conductora en suspensión en un electrolito atraviesa un pequeño orificio. Las células deben estar en forma individual y lasuspensión diluida. La altura de cada pulso es proporcional al volumen de la partícula. Controlando la cantidad de la suspensión que circula a través del orificio es posible contar y medir el tamaño de las partículas.
Citofluorimetro
Se busca lograr pasar las células en forma individual por un conducto. Se detecta el choque del laser con las células. La limpieza debe ser absoluta, para no taparlos capilares ni inducir errores en la medición.
Peso Seco
Se toma una muestra húmeda previamente pesada, se seca y se vuelve a pesar, para determinar la cantidad de agua y así obtener la masa seca de microorganismo. Por medio de este método se pueden cuantificar microorganismos filamentosos, aunque se debe cuidar que la muestra debe ser representativa. El tiempo depende de la temperatura,generalmente va entre 8 a 15 horas
Turbidimetría
Se basa en la relación entre la absorbancia y la concentración de las especies de la muestra. La absorbancia, es la cantidad de intensidad de luz que absorbe una muestra,
Abs = Ɛ * C * L
Siendo Ɛ el coeficiente de extinción molar, C la concentración y L  la longitud atravesada por el haz de luz.
La relación es lineal dentro de cierto rango. Loque va a estar en relación a la concentración de la muestra y la calidad del equipo (espectrofotómetro). La muestra debe ser homogénea para evitar errores en la lectura. Cuando la muestra está muy concentrada, comienza un efecto de difracción (dispersión de las ondas) de la luz, por lo que el equipo recibe más luz de la que realmente debería pasar.
Volumen empacado de Células
El volumen queocupan las células está directamente relacionado con la masa celular. Se toma un volumen conocido de muestra, luego se centrifuga, obteniéndose un pellet. El volumen total será el de las células mas el volumen de hueco entre las células. La morfología celular, la presencia de sólidos y la osmolaridad pueden afectar en el resultado obtenido.

Métodos Indirectos de cuantificación
Los métodos...