Medidas de bioseguridad
Páginas: 3 (711 palabras)
Publicado: 5 de septiembre de 2012
CATALASA, PEROXIDASA Y POLIFENOLOXIDASA EN PITAYA AMARILLA (Acanthocereus pitajaya): MADURACIÓN Y SENESCENCIA
LUCÍA ESTRELLA BAQUERO DUARTE, JHON ALEXANDER CASTRO RIVERA, CARLOS EDUARDO NARVÁEZCUENCA
Materiales y Métodos
Los frutos de pitaya amarilla se adquirieron en los principales mercados de Bogotá, Colombia, en estado verde-pintón (verde 90%-amarillo 10%), visiblemente sanos. Fuerondesinfectados con hipoclorito de sodio al 10%, y almacenados en condiciones normales de maduración. Se evaluó el CO2 producido por los frutos a través de la técnica cromatográfica.
La cuantificación sehizo por el método de estándar externo empleando CO2 adquirido en AGA-FANO®. La intensidad respiratoria se reportó como mg de CO2 kg-1 de fruta h-1. La técnica de extracción simultánea para las tresenzimas se basó en reportes previos, los polvos de acetona permitieron que el extracto presentara una alta actividad con una mayor estabilidad, además de evitar la inactivación enzimática durante laextracción. Los polvos de acetona fueron resuspendidos en 25 mL buffer de fosfatos 200 mM, pH 6,8 bajo agitación continua por 24 h a 2 °C.
Posteriormente, la suspensión fue centrifugada a 12.000 x gdurante 20 min a 2 ºC; el sólido se desechó, el sobrenadante fue mantenido a 2 ºC durante máximo 2 h, tiempo en el que se efectuó la cuantificación de proteína y de actividad enzimática. Paracuantificar la proteína en los extractos enzimáticos se empleó el método de Bradford modificado por Zor y Sellinger (1996), en el que se mide la absorbancia a 450 y 590 nm y se interpola la relación entre lasdos absorbancias en la curva de calibración.
Para la medida de actividad CAT se empleó el método permanganométrico (Ulrich, 1974). La mezcla de reacción con volumen final de 1 mL, contenía 100 µL deextracto enzimático (24 – 40 µg de proteína), H2O2 500 mM preparado en buffer fosfatos 200 mM pH 7,0; esta mezcla se mantuvo a 40 °C.
La actividad POD fue estimada por la medida del incremento de...
LUCÍA ESTRELLA BAQUERO DUARTE, JHON ALEXANDER CASTRO RIVERA, CARLOS EDUARDO NARVÁEZCUENCA
Materiales y Métodos
Los frutos de pitaya amarilla se adquirieron en los principales mercados de Bogotá, Colombia, en estado verde-pintón (verde 90%-amarillo 10%), visiblemente sanos. Fuerondesinfectados con hipoclorito de sodio al 10%, y almacenados en condiciones normales de maduración. Se evaluó el CO2 producido por los frutos a través de la técnica cromatográfica.
La cuantificación sehizo por el método de estándar externo empleando CO2 adquirido en AGA-FANO®. La intensidad respiratoria se reportó como mg de CO2 kg-1 de fruta h-1. La técnica de extracción simultánea para las tresenzimas se basó en reportes previos, los polvos de acetona permitieron que el extracto presentara una alta actividad con una mayor estabilidad, además de evitar la inactivación enzimática durante laextracción. Los polvos de acetona fueron resuspendidos en 25 mL buffer de fosfatos 200 mM, pH 6,8 bajo agitación continua por 24 h a 2 °C.
Posteriormente, la suspensión fue centrifugada a 12.000 x gdurante 20 min a 2 ºC; el sólido se desechó, el sobrenadante fue mantenido a 2 ºC durante máximo 2 h, tiempo en el que se efectuó la cuantificación de proteína y de actividad enzimática. Paracuantificar la proteína en los extractos enzimáticos se empleó el método de Bradford modificado por Zor y Sellinger (1996), en el que se mide la absorbancia a 450 y 590 nm y se interpola la relación entre lasdos absorbancias en la curva de calibración.
Para la medida de actividad CAT se empleó el método permanganométrico (Ulrich, 1974). La mezcla de reacción con volumen final de 1 mL, contenía 100 µL deextracto enzimático (24 – 40 µg de proteína), H2O2 500 mM preparado en buffer fosfatos 200 mM pH 7,0; esta mezcla se mantuvo a 40 °C.
La actividad POD fue estimada por la medida del incremento de...
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